ICS 11.220 B 41 团体标准 T/CVMA 1—2018 禽白血病净化技术规范 Technical specification s for eradication of Avian Leukosis 2018 - 10-24发布 2018 - 10 -24实施 中 国 兽 医 协 会 发布 中国兽医协会 CVMAT/CVMA 1—2018 I 前 言 本标准按 GB/T 1.1 -2009给出的规则起草。 本标准由中国兽医协会提出并归口。 本标准起草单位：中国动物疫病预防控制中心 、山东农业大学、 扬州大学 、中国农业科学院哈尔滨 兽医研究所 。 本标准主要起草人： 王传彬、赵鹏、 翟新验、 杨林、王笑梅、 秦爱建、蒋菲、 刘林青、 宋晓晖、 高 玉龙、钱琨、顾小雪、刘玉良、 叶建强、 刘洋、曲萍、王睿男、毕一鸣、徐琦。 中国兽医协会 CVMAT/CVMA 1—2018 1 禽白血病净化技术 规范 1 范围 本标准规定了种鸡群禽白血病净化检测和净化状态维持相关的技术规范。 本标准所列种鸡各生长阶段净化 检测技术主要适用于有禽白血病净化需求的原种鸡群（或称核心 群） ， 其他 类型鸡群也可参照执行。 所列禽白血病净化状态维持技术适用于已实现禽白血病净化的鸡群 。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 18635 动物防疫 基本术语 GB/T 26436 禽白血病诊断技术 NY/T 680 禽白血病病毒 p27抗原酶联免疫吸附试验方法 《中国兽药典》 3 术语和定义 GB/T 18635确定的及下列术语和定义适用于本文 件。 3.1 种鸡 breed ing chicken 经过不断选种、 选育， 按育种组织制订的标准鉴定承认的鸡品种， 按经济用途分为蛋用型、 肉用型、 肉蛋兼用型和观赏型。 3.2 原种鸡群 pedigree breeder flock 按照四系配套原则，鸡的遗传谱系分为曾祖代、祖代、父母代、商品代，只有曾祖代的鸡可以自繁 留种，其他后代都不能留做和它同级的种，通常将曾祖代称为原种 鸡群或者核心群。 3.3 动物疫病净化 animal disease eradication 有计划地在特定区域或场所对特定动物传染病通过监测、检验检疫、隔离、扑杀、销毁等一系列技 术和管理措施最终达到在该 范围内动物个体不发病和无感染状态的根除消灭疫病病原的过程， 目的是清 中国兽医协会 CVMAT/CVMA 1—2018 2 除可传染的病原因子，从而达到并维持动物个体和群体健康。这个特定区域或场所是人为确定的一个固 定范围，可以是一个养殖场、一个自然区域、一个行政区，也可以是一个国家。本标准所指净化主要指 在种鸡群中（通常为一个种鸡场）， 通过雏鸡胎粪检测、不同日龄鸡血液 病毒分离、公鸡精液中病毒分 离等方法，发现并淘汰鸡群中感染禽白血病的鸡只，最终达到鸡群消除该病的过程。 4 净化检测 程序 4.1 出壳雏鸡胎粪检测与淘汰 4.1.1 将种蛋置于出壳纸袋（纸盒）中 隔离孵化，每只（羽）种鸡所产种蛋 单独使用一个 出壳纸袋（纸 盒），以免出雏时发生横向传播。 4.1.2 出壳后将雏鸡胎粪挤压于灭菌的 1.5 mL离心管中，离心管中预先加入 0.5 mL样品稀释液（含体 积分数10 %新生牛血清的 PBST溶液或商品化试剂盒中专用稀释液），充分震荡混匀。 对一只（羽）母 鸡的雏鸡采集完胎粪后， 更换一次性手套或对双手信息消毒后 ，方可采集下一只 （羽） 母鸡的雏鸡胎粪。 4.1.3 将雏鸡胎粪样品置入液氮中快速冷冻后取出 ，放入37 ℃水浴锅中融化，反复冻融三次，使禽白 血病病毒 p27抗原充分释放，离心取上清液用于检测胎粪中禽白血病病毒 p27抗原。 4.1.4 禽白血病病毒p27抗原检测，可按照NY/T 680标准或采用等效的商品化酶联免疫吸附 试验 （ELISA）试剂盒 进行，也可采用针对 禽白血病病毒 p27抗原的单克隆抗体建立的 胶体金试纸条等快速 检测方法。 4.1.5 同一只（羽）母鸡所产的雏鸡中，若有一只（羽）雏鸡胎粪 检测为禽白血病病毒 p27抗原阳性， 则该纸袋（纸盒）中所有雏鸡视为阳性，相应雏鸡及其对应母鸡应全部淘汰。 4.1.6 阴性鸡作为育种选留进行隔离饲养 ，同一母鸡的 阴性雏鸡放于 同一笼中。在育雏期间 每个笼具 之间应采取阻隔措施以避免水平传播 ，避免笼间直接接触 和直接气流的对流。 可在每个笼具之间 用纸板 阻隔，在不影响通风情况下纸板高度 应尽量高。 4.2 育雏后期的检测与淘汰 4.2.1 在育雏结束即将转入育成鸡舍前，对每只鸡无菌采集抗凝血，按照 GB/T 26436 规定程序接种 DF-1细胞进行病毒分离，培养 9天（d）后取细胞培养上清 ，按4.1.4规定方法 检测禽白血病病毒 p27 抗原。 4.2.2 检测为阳性的鸡 应淘汰，不再作为育种选育个体。 对检测为阴性的选留后备种鸡 ，应维持小群 隔离饲养。 4.3 开产初期的检测与淘汰 4.3.1 每只（羽）母鸡取开产后的初产蛋 2～3枚采集蛋清，蛋清反复冻融三次 ，按照4.1.4规定方法 逐个检测禽白血病病毒 p27抗原。也可无菌采集 母鸡抗凝血， 按照4.2.1规定方法进行禽白血病病毒分 离鉴定。 4.3.2 公鸡分别采集抗凝血和精液同时接种 DF-1细胞，按照4.2.1规定方法进行禽白血病病毒分离鉴 定。精液病毒分离鉴定具体操作见附录 A。 4.3.3 检测为阳性的鸡 应淘汰，不再 作为育种选育个体。 对检测为阴性的选留后备种鸡 ，继续维持小 群隔离饲养。 中国兽医协会 CVMAT/CVMA 1—2018 3 4.4 留种前的检测与淘汰 4.4.1 取每只（羽）母鸡 所产种蛋2～3枚采集蛋清， 检测方法同 4.3.1。 4.4.2 公鸡检测方法同 4.3.2。 4.4.3 检测为阳性的鸡 应淘汰，不再 作为育种选育个体。 对检测为阴性的选留后备种鸡 ，继续维持小 群隔离饲养。 4.5 种蛋的选留和孵化 按照本标准 4.1～4.4规定程序淘汰所有阳性鸡后，每只母鸡仅选用 1只检测为阴性公鸡的精液进行 人工授精。按 育种规定时间留足种蛋，每只母鸡的种蛋均标号。将每只母鸡的种蛋置于写有该母鸡标号 的专用孵化纸袋（纸盒）中， 防止不同母鸡的种蛋 直接接触， 置于出雏箱中出雏。 4.6 不同世代的 持续检测 经检测合格的种蛋孵出的雏鸡作为净化后第二世代鸡， 继续按照本标准 4.1～4.5规定的程序实施第 二世代的检测和净化。后续世代按此程序继续循环进行，直至评估达到 附录B所列禽白血病净化 评估标 准。 5 净化周期与终止 5.1 净化周期确定 净化时可根据种鸡所处 育种时期，对照本标准 4.1～4.5的任何一个时间节点启动净化程序 。不同种 鸡场可根据其技术条件分别选择本标准 4.1～4.5的任何一时间节点进行检测，但按照本标准 4.1～4.5 从出壳开始至留种过程中所有时间节点全部进行检测是实现净化的最短周期。 5.2 净化效果评估 净化效果评估 应按照国家农业行业行政主管部门 制定的禽白血病净化评估程序和 净化评估标准进 行。净化评估标准见附录 B。 5.3 达到净化鸡群 的检测比例调整 对按照5.2评估达到净化标准的原种场无需再按照本 标准4.1～4.5要求进行普遍性检测， 可按照 5.2 或不低于10 %的比例进行抽 样监测。检测结果不符合 5.2所要求标准，则按照本 标准4.1～4.5所列检测 规程重新进入 检测净化程序。 6 已净化鸡群 的净化状态维持措施 6.1 种源的选择 对饲养进口祖代及其以下代次的鸡场， 应从无外源性禽白血病病毒感染的育种公司购入苗鸡。 应要 求供应商提供初产种蛋 (100～200枚)，检测蛋清中 p27抗原为阴性。同时， 可要求供应商提供相关种鸡 群在相应年龄（ 23周龄后）的 禽白血病病毒 血清抗体检测报告和留种孵化前 所产种蛋的蛋清p27抗原检 测报告。禽白血病病毒 血清抗体检测 ，可采用针对禽白血病 病毒p27蛋白抗体 的ELISA检测方法， 同时也 中国兽医协会 CVMAT/CVMA 1—2018 4 可采用针对禽白血病 A/B亚群和J亚群抗体的商品化ELISA试剂盒检测。禽白血病病毒 p27蛋白抗体的 ELISA检测操作程序 见附录C 6.2 鸡群禽白血病病毒感染状态 监测 种鸡群在饲养过程中 应进行禽白血病 定期监测，以了解鸡群禽白血病病毒的感染状态。可在种鸡群 开产后、留种蛋前， 采集 500份左右血清样品， 用 ELISA方法检测禽白血病 病毒A/B亚群及J亚群抗体或p27 蛋白抗体 。 同时， 采集种蛋用 ELISA方法检测蛋清中的 禽白血病 p27抗原。 如果血清抗体阳性率或蛋清 p27 抗原阳性率超过 1 %时，应对鸡群 采集抗凝血 接种DF-1细胞进行病毒分离鉴定。 6.3 鸡群之间水平传播 的预防 种鸡场应执行全进全出制度 。饲养已经净化的品系时 ，应避免不同来源的 种鸡在同