ICS 65. 020. 01 B 40 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T20574—2006 蜂胶中总黄酮含量的测定方法 分光光度比色法 Method for determination of total flavonoids in propolis- Colorimetric method 2006-09-14发布 2007-01-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T20574—2006 前言 本标准由中华全国供销合作总社提出并归口 本标准起草单位：国家蜂产品质量监督检验中心。 本标准主要起草人：马兰宇、曾纪琰。 本标准为首次发布。 请注意本标准的某些内容有可能涉及专利。本标准的发布机构不应承担识别这些专利的责任。 GB/T20574—2006 引言 成分，分光光度比色法可以测定黄酮成分的总量 本标准采用分光光度比色法，该方法具有设备要求简单、操作简便、易于推广普及的特点。 GB/T20574—2006 蜂胶中总黄酮含量的测定方法 分光光度比色法 1范围 本标准规定了蜂胶中黄酮类化合物的总含量测定方法。 本标准适用于蜂胶，包括原始蜂胶、精制蜂胶及蜂胶的乙醇溶液 本标准可用于测定黄酮类化合物的总含量在0.1%以上的蜂胶。 2原理 溶于乙醇的黄酮类化合物在弱碱性条件下，与显色剂三价铝离子结合生成有色物质，可在415nm 较，可定量测定黄酮类化合物的含量 3试剂和材料 除非另有说明，在分析中至少使用分析纯试剂和蒸馏水或去离子水。 3.1乙醇（95%）。 3.2无水乙醇。 3.3硝酸铝溶液（100g/L）：称取Al(NO）·9H,O17.60g，加水溶解，定容于100mL容量瓶中， 摇匀。 3.4醋酸钾溶液（9.8g/L）：称取醋酸钾9.814g，加水溶解，定容于100mL容量瓶，摇勺。 3.5芦丁标准溶液 3.5.1芦丁对照品储备液（1.0g/L）：精密称取经120C减压真空干燥至恒重的芦丁对照品50mg，置 于50mL容量瓶中，加无水乙醇（3.2）溶解并稀释至刻度，摇匀。 3.5.2芦丁对照品使用溶液（0.2g/L）：精密吸取芦丁对照品储备液（3.5.1)10mL，置于50mL容量 瓶中，加无水乙醇（3.2)至刻度，摇匀。 4仪器设备 4.1可见分光光度计。 4.2减压干燥箱（真空；温度200℃）。 4.3高速组织捣碎机：8000r/min~12000r/min。 5试样的制备 5.1原始蜂胶 原始蜂胶指未经过提纯处理的天然蜂胶。 5.1.1将同一份样品的所有蜂胶块（取约50g100g）置于冷冻条件下冷冻，待其变硬变脆后，用木锤 敲打砸成小碎块，用高速组织捣碎机（4.3）粉碎后，过14目筛，混匀 5.1.2称取上述已粉碎的蜂胶样品约1g，精确到1mg。置烧杯中，加入乙醇（3.1)约30mL，烧杯置 于65℃水浴中加热约45min，搅拌使之溶解。取出后冷却至室温，上清液使用快速滤纸过滤。烧杯、漏 斗、滤渣及滤纸用少量乙醇（3.1)洗涤至滤液无色。最后用乙醇（3.1)稀释至50mL，摇匀，待测。 1 GB/T20574—2006 5.2精制蜂胶 精制蜂胶指经过除去蜂蜡和砂石碎块等杂质的提纯蜂胶。 称取蜂胶样品0.5g，精确到1mg。置烧杯中，按5.1.2制备。 5.3蜂胶溶液 蜂胶溶液指蜂胶的乙醇提取液。 吸取蜂胶溶液样品5mL～10mL，置于50mL容量瓶中，加乙醇（3.1)稀释至刻度，摇匀，待测。或 吸取蜂胶样品溶液5mL~10mL，置于50ml容量瓶中。称重，精确到1mg。加乙醇（3.1)稀释至刻 度,摇匀，待测。 6分析步骤 6.1标准曲线的绘制 6.1.1精密吸取芦丁对照品使用溶液（3.5.2)1mL，2mL，3mL，4mL，5mL，6mL，分别置于50mL 容量瓶中。 6.1.2加乙醇（3.1）至总体积为15mL，依次加人硝酸铝溶液（3.3)1mL，醋酸钾溶液（3.4)1mL，摇 匀，加水至刻度，摇匀。静置1h。 6.1.3用1cm比色杯于415nm处，以30%乙醇溶液为空白，测定吸光度。 6.1.4以50mL中芦丁质量（mg）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线或按直线回归方程计算。 线性工作范围0mg~1.2mg（50mL）。 6.2空白试验 至刻度，摇匀。 6.3测定 6.3.1精密吸取待测试料溶液1.0mL.置于50mL容量瓶中，按6.1.2进行操作。 6.3.2以空白试液（6.2)作参比，用1cm比色杯，在波长415nm处测定试料溶液的吸光度。 6.3.3查标准曲线或通过回归方程计算，求出试料溶液中的黄酮类化合物含量（mg）。 7结果的表述 7.1蜂胶中黄酮类化合物的总含量按式（1)计算。 X= ...(1) 式中： SAC X一黄酮类化合物的总含量，%； 由标准曲线上查出或由直线回归方程求出的样品比色液中芦丁质量，单位为毫克（mg）； m W—样品的质量或体积，单位为克（g)或毫升(mL)； d一稀释比例。 7.2计算结果表示到小数点后两位， 8允许差 同一操作者两次平行测试结果允许： 原始蜂胶 相对相差≤8%； 精制蜂胶及蜂胶溶液 相对相差≤5%。 2