ICS 65.020 B 16 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 2258—2012 香蕉黑条叶斑病原菌分子检测技术规范 Molecular detection for pathogen of banana black leaf streak disease 行业标准信息服务平台 2012-12-07 发布 2013-03-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T 2258—2012 前 本标准按照GB/T1.1给出的规则起草。 本标准由农业部农垦局提出。 本标准由农业部热带作物及制品标准化委员会归口。 本标准起草单位：中国热带农业科学院环境与植物保护研究所。 本标准主要起草人：谢艺贤、漆艳香、张欣、蒲金基、张贺、陆英、张辉强。 行业标准信息服务平台 1 NY/T2258—2012 香蕉黑条叶斑病原菌分子检测技术规范 1范围 本标准规定了香蕉黑条叶斑病原菌（MycosphaerellafijiensisMorelet）分子检测方法。 本标准适用于香蕉种苗及大田植株上的黑条叶斑病原菌的定性检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 凡是注口期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件·其最新版本（包括所的修改单）适用于本文件 SN/T1193 AT 3术语和定义 RES 3. 1 香蕉黑条叶斑病 (Mycos 由斐济球腔菌 enMorele引起的 烧种为害香 bhaerella 该病害病原菌的分 分类地位 寄主范围、地理分布及其为害折状见A4A6 3. 2 ribosomal DNAinternal transcribed spacers, 间隔区 真核生物核糖体基因内转 CDNA-ITS通常包括ITSE5 南区 工 3.3 聚合酶链式反应 polymerase chain reaction,PCR 模板基因序 的反 根据模板序列设 相结合 相应的段互补 序列发生退火而 接着在DNA聚合 计的两条引物 酶的作用下以四种 为底物，使引物得以延伸， 新重复 变性、退火和延伸这 CN 后不 一循环，使欲扩增的 4原理 （-DNA-ITS）特有 根据香蕉黑条叶斑病原菌核糖体基因内转录间隔区 减基序列设计特异性引物 进行PCR扩增。依据是否扩增获得预期1009bp的DNA片段，判断样 是否携带香蕉黑条叶斑病 原菌。 仪器设备及试剂 行业标准信， 见B.1和B.2。 6取样 按附录A描述的症状仔细检查香蕉叶片，发现香蕉黑条叶斑病疑似症状，即取叶片200g以上，装 人牛皮纸袋中，送实验室检测 7显微观察 从疑似病样病斑上挑取或用透明胶粘取灰色霉状物制成临时玻片进行镜检，观察有无类似斐济球 1