ICS 65.020 B 16 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 2251--2012 香蕉花叶心腐病和束顶病病原分子检测 技术规范 Technical specification of molecular detection for pathogen of banana mosaic and heart rot disease and bunchy top disease 行业标准信息服务平台 2013-03-01实施 2012-12-07 发布 中华人民共和国农业部 发布 NY/T 2251—2012 前 言 本标准按照GB/T1.1给出的规则起草。 本标准由农业部农垦局提出。 本标准由农业部热带作物及制品标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：中国热带农业科学院环境与植物保护研究所。 本标准主要起草人：黄俊生、彭军、杨腊英、王国芬、梁昌聪、郭立佳、刘磊。 行业标准信息服务平台 1 NY/T 2251-2012 香蕉花叶心腐病和束顶病病原分子检测技术规范 1范围 本标准规定了香蕉花叶心腐病和束顶病病原的分子检测方法。 本标准适用于香蕉组培培养物、种苗及大田植株上的花叶心腐病和束顶病病原的定性检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。 SN/T1193基因检验实验室技术要求 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3. 1 cucumber mosaic virus,CMV 黄瓜花叶病毒香蕉株系 引起香蕉花叶心腐病的病原物。该病毒的分类地位、寄主范围、地理分布及其为害症状参见附录 A. 3. 2 香蕉束顶病毒banana bunchy topvirus,BBTV 引起香蕉束顶病的病原物。该病毒的分类地位、寄主范围、地理分布及其为害症状参见附录A。 3.3 外壳蛋白基因 coat protein gene,CP gene 编码病毒外壳蛋白的基因。 3. 4 复制酶基因replicase gene 编码病毒复制酶的基因。 3.5 聚合酶链式反应polymerase chain reaction,PCR 模板基因序列先经高温变性成为单链，在DNA聚合酶作用和适宜的反应条件下，根据模板序列设 计的两条引物分别与模板DNA两条链上相应的一段互补序列发生退火而互相结合，接着在DNA聚合 酶的作用下以四种脱氧核糖核酸(dNTP)为底物，使引物得以延伸,然后不断重复变性、退火和延伸这 一循环，使欲扩增的基因片段以几何倍数扩增。 3. 6 逆转录聚合酶链式反应 Zreverse transcription-polyrnerase chain reaction,RT-PCR RT-PCR是先利用依赖于RNA的DNA聚合酶，将待测RNA逆转录为cDNA；再以逆转录后的一 段DNA作为模板，以模板DNA两端序列互补的一对特异性寡核苷酸序列作为引物，在四种脱氧核糖 核苷三磷酸存在下,利用依赖于DNA的DNA聚合酶的催化作用。经过数十次变性、退火和延伸的反 应循环，使模板上介于两个引物之间的DNA片段得到特异性的技术扩增，再通过电泳等手段检测到被 特异性扩增的片段。