ICS 65.020 B 16 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 2252—2012 槟榔黄化病病原物分子检测技术规范 Molecular detection for pathogen of arecanut yellow leaf disease 行业标准信息服务平台 2012-12-07 发布 2013-03-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T 2252—2012 言 前 本标准按照GB/T1.1给出的规则起草。 本标准由农业部农垦局提出。 本标准由农业部热带作物及制品标准化委员会归口。 本标准起草单位：中国热带农业科学院环境与植物保护研究所。 本标准主要起草人：罗大全、车海彦、温衍生、徐雪莲。 行业标准信息服务平台 NY/T 2252-2012 槟榔黄化病病原物分子检测技术规范 1 范围 本标准规定了槟榔黄化病病原物的检测方法。 本标准适用于槟榔植株中黄化病病原物的定性检测。 2术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2. 1 植原体phytoplasma 植物叶片黄化和发育畸形等症状。 2. 2 槟榔黄化病arecanut yellow leaf disease 由植原体引起的一种槟榔病害，该病害病原菌的分类地位、寄主范围、危害症状及地理分布见 D. 1~D. 4。 2. 3 聚合酶链式反应polymerase chain reaction,PCR 模板基因序列先经高温变性成为单链，在DNA聚合酶作用和适宜的反应条件下，根据模板序列设 计的两条引物分别与模板DNA两条链上相应的一段互补序列发生退火而互相结合，接着在DNA聚合 酶的作用下以四种脱氧核糖核酸(dNTP)为底物，使引物得以延伸，然后不断重复变性、退火和延伸这 一循环，使欲扩增的基因片段以几何倍数扩增。 2. 4 巢式聚合酶链式反应 nested PCR,巢式 PCR 利用两套PCR引物对（巢式引物）进行两轮PCR扩增反应，首先用一对外引物进行第一轮PCR扩 增，然后再使用第一对引物扩增的DNA序列内部的一对内引物再次扩增。 3原理 利用植原体通用引物R16mF2/R16mR1和R16F2n/R16R2，对待检样品进行巢式PCR扩增，依据 扩增的片段序列的限制性片段长度多态性(restrictionfragmentlengthpolymorphism，RFLP)图谱是否 与槟榔黄化植原体核糖体DNA(16SrDNA)序列的RFLP图谱一致，判断样品中是否存在槟榔黄化植 标准信息服务平台 原体。 4巢式PCR检测所用仪器，试剂和方法 见附录A。 5巢式PCR检测 5.1田间取样 根据附录D.3和D.4的描述，初步确定槟榔植株是否为槟榔黄化病疑似病株。田间取疑似槟榔植 1