SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3287—2012 棉花皱叶病毒分子检疫鉴定方法 Molecular detection and identification of cotton leaf crumplevirus 行业标准信息服务平台 2012-10-23发布 2013-05-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3287—2012 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国浙江出入境检验检疫局、中华人民共 和国广东出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：张永江、张明哲、李明福、冯黎霞、李桂芬。 行业标准信息服务平台 SN/T 3287—2012 棉花皱叶病毒分子检疫鉴定方法 1范围 本标准适用于进出境植物检疫中棉花皱叶病毒的检疫鉴定。 2方法原理 棉花皱叶病毒学名：Cottonleafcrumplevirus，缩写：CLCrV。该病毒的分子生物学特征是本标准 制定的主要依据。 3仪器设备、用具及试剂 3.1仪器设备 PCR仪、电泳系统、高速冷冻离心机、凝胶成像系统、振荡器、4℃冰箱、电子分析天平（0.001g）、超 净工作台、水浴锅、一80℃超低温冰箱、高压灭菌锅、制冰机、微波炉。 3.2用具 可调移液器（2.5μL,10μL,20μL,100μL,1000μL)及灭菌的吸头、离心管、PCR管和研钵等。 3.3试剂 除有特殊说明外，所有实验用试剂均为分析纯或生化试剂。 实时荧光PCR试剂、三氯甲烷、异戊醇、乙醇、TaqDNA聚合酶、DNA分子标记、溴化乙锭、琼脂 糖等。 试剂配制见附录B。 4检疫鉴定方法 4.1常规PCR检测 提取样品DNA，设置阳性对照、阴性对照和空白对照，进行常规PCR扩增。具体操作步骤见附 录 C。 4.2实时荧光PCR检测 提取样品DNA，设置阳性对照、阴性对照和空白对照，进行实时荧光PCR扩增。具体操作步骤见 附录 D。 5 结果判断 样品经PCR及实时荧光PCR检测为阴性时，判定样品不携带CLCrV。 1