SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3752—2013 苹果星裂壳孢果腐病菌检疫鉴定方法 Detection and identification of Phacidiopycnis washingtonensis Xiao & J.D Rogers 行业标准信息服务平台 2013-11-06 发布 2014-06-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3752—2013 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国广东出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：王卫芳、冯黎霞、胡佳、章柱、华丽、 行业标准信息服务平台 SN/T3752—2013 苹果星裂壳孢果腐病菌检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了植物检疫中苹果星裂壳孢果腐病菌的检疫鉴定方法。 本标准适用于进境苹果和梨植株及其果实中苹果星裂壳孢果腐病菌的检疫鉴定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SN/T2455进出境水果检验检疫规程 3检疫鉴定原理 苹果星裂壳孢果腐病菌在寄主上的症状、病菌形态学特征与培养性状及分子生物学特征是制定本 标准的主要依据。该病菌的分类地位、寄主范围、分布和为害症状等背景资料参见附录A。 4仪器及用具 4.1仪器 体视显微镜、生物显微镜、超净工作台、高压灭菌器、生物培养箱、台式高速离心机、PCR扩增仪、凝 胶成像仪、电子天平（感量0.01g）、水浴箱、pH计。 4.2用具 样品袋、标签、放大镜、镊子、解部刀、酒精灯、接种针、培养皿（直径9cm）、烧杯、三角瓶、试管、量 筒、载玻片、盖玻片、研钵及研杆、微量移液器（可调式范围：2.5μL～1000uL）、离心管。 5试剂和培养基 5.1试剂 1%NaCIO溶液、无水乙醇、70%乙醇、无菌双蒸水、2%CTAB提取缓冲液、10%SDS溶液、3mol/L 醋酸钠溶液、PCR试剂（包括Taq聚合酶、dNTP、Buffer）、苯酚、三氯甲烷、异戊醇、Tris-HCl、EDTA、 琼脂糖、DNA分子量标、TBE电泳缓冲液。 5.2培养基 马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）：每1000mLPDA由200g去皮马铃薯，20g葡萄糖，18g琼脂 配制而成。 酸性马铃薯葡萄糖琼脂培养基（APDA）：每1000mLPDA中加入4.0mL25%乳酸。 1