43 DB43/T2175—2021 湖南省地方标准 辣椒远缘杂交胚拯救技术操作规程 Technical Regulation for embryo rescue of Distant Hybrid in PepperICS CCS 67.080.20 B 31 发 布 湖南省市场监督管理局2021-08发布-29 2021-10实施-29 DB43/T 2175—2021 I 目 次 前言 ································ ································ ································ ························ Ⅲ 1 范围 ································ ································ ································ ····················· 1 2 术语和定义 ································ ································ ································ ············ 1 3 试剂和设备 ································ ································ ································ ············ 1 4 胚拯救培养基制备 ································ ································ ································ ··· 2 5 胚拯救技术流程 ································ ································ ································ ······ 2 附录A（资料性） 辣椒胚拯救培养基配方 ································ ································ ······· 3 DB43/T 2175—2021 II DB43/T 2175—2021 III 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 -2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由湖南农业农村厅提出。 本文件由湖南省农业标准化技术委员会归口。 本文件主要起草单位：湖南农业大 学、湖南省蔬菜研究所。 本文件主要起草人：杨博智、周书栋、郑井元、马艳青、戴雄泽、李雪峰、张竹青、陈文超、杨莎、 梁成亮、李鑫、邹学校。 DB43/T 2175—2021 IV DB43/T 2175—2021 1 辣椒远缘杂交胚拯救技术规程 1 范围 本文件规定了辣椒远缘杂交胚拯救的术语和定义、试剂和设备、培养基制备、胚拯救技术流程等操 作规程。 本文件适用于辣椒远缘杂交胚拯救。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 2.1 远缘杂交 指不同种、属或亲缘关系更远的植物类型间进行的杂交。 2.2 胚拯救 植物远缘杂交获得的合子胚常在发育早起阶段就败育或退化，无法收获杂交种子。胚拯救指采用组 织培养技术，将合子胚转至适合的培养基中离体培养，使其能正常发育成完整植株的方式。 3 试剂和设备 3.1 试剂 所有试剂等级均为分析纯，见表 1。 表1 辣椒远缘杂交胚拯救技术所需试剂 试剂 名称 无机试剂 次氯酸钠、氢氧化钠、盐酸、硝酸铵、硝酸钾、氯化钙、七水硫酸镁、磷酸二氢钾、碘化钾、 硼酸、四水硫酸锰、七水硫酸锌、钼酸钠、氯化钴、硫酸亚铁、 EDTA二钠盐、 有机试剂 酒精、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇、盐酸硫胺素、甘 氨酸、叶酸、生物素 植物生长调节剂 萘乙酸、激动素、赤霉素、 6-苄氨基腺嘌呤、吲哚 -3-乙酸 其他 琼脂粉、蔗糖 3.2 仪器设备 超纯水仪、电子分析天平（精确度： 0.0001 g）、pH计（或pH试纸） 、刻度容量瓶（量程 分别为100 mL、 500 mL） 、移液枪（量程分别为 100 µL、1 mL、10 mL） 、低温冷藏冰箱（温度范围： 0～10℃） 、高压蒸 汽灭菌锅 DB43/T 2175—2021 2 4 胚拯救培养基制备 4.1 培养基类型 培养基包括胚拯救培养基和幼胚分化成苗培养基，其配方见附录 A。 4.2 消毒和灭菌 培养基配制 好后，调 pH值为5.8，置于高压蒸汽灭菌锅中 121℃，1.05 kg/cm2条件下灭菌 15 min。 5 胚拯救技术流程 5.1 授粉 收集父本花粉，选取母本植株上将开未开的花苞，去除雄蕊，对其进行人工授粉，授粉 24 h后用 75 mg/L的2,4-D溶液涂抹母本植株上授粉花苞的花梗。 5.2 幼胚培养 选用辣椒为授粉后 18 d获得的青果，流水下冲洗果实表面 30 s，在超净工作台中，用 75％酒精棉 球擦拭果实表面，用消毒后的解剖刀将果实竖切成两半，再用无菌镊子取出果实内未成熟种胚，接种至 胚拯救培养基中，黑暗培养至胚根产生。培养温度为（ 28±1）℃。 5.3 幼胚分化成苗 在超净工作台中，取出带胚根的辣椒胚，剥离种皮，接种于幼胚分化成苗培养基中培养至成苗。培 养条件为光照阶段（ 28±1）℃，黑暗阶段（ 20±1）℃，光照时间 16 h/d，光照强度 2000 lx。 5.4 炼苗与移栽 待再生苗长至（ 4～7）片真叶时， 打开培养瓶瓶盖，置光照培养室中适应外界环境 2 d～3d后。将 组培苗取出，洗净根部的培养基，移栽至基质中 黑暗条件下 炼苗，温度为（ 28±1）℃，湿度90％。炼 苗5 d后，将室内环境逐步调整到与辣椒苗在外界生长的环境相近，继续培养 15 d，移栽幼苗至室外。