凹凸棒石脱霉剂的霉菌毒素吸附率测定 DeterminationofmycotoxinadsorptionratebyattapulgitemoldremoverT/XYATB007-2023团体标准 2023-11-01发布 2023-12-01实施 江苏省盱眙凹凸棒石粘土行业协会发布ICS73.080 C3099 全国团体标准信息平台 T/XYATB007-2023 1前  言 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规则 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由江苏省盱眙凹凸棒石粘土行业协会提出并归口。 本文件起草单位：江苏省盱眙凹凸棒石粘土行业协会、江苏神力特生物科技股份有限公司、盱眙县 凹土应用技术研发与成果转化中心、全国非金属矿产品及制品标准化技术委员会凹土工作组。 本文件主要起草人：黄正君、汪强、宋秋月、董晓、李宜鹏、任方奎、臧垚、郑达俊、刘香云、文 举。 全国团体标准信息平台 T/XYATB007-2023 2凹凸棒石脱霉剂的霉菌毒素吸附率测定 1范围 本文件规定了凹凸棒石载体脱霉剂对霉菌毒素吸附率的检测方法。 本文件适用于凹凸棒石载体脱霉剂对黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、伏马毒素B1、赭 曲毒素A吸附率的检测。 本文件的检出限：黄曲霉毒素B1：1.0μg/kg；玉米赤霉烯酮：0.5μg/kg；呕吐毒素：1.0μg/kg；伏 马毒素B1：100.0μg/kg；赭曲霉毒素A：1.0μg/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文 件。 GB/T6678化工产品采样总则 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T8170数值修约规则与极限数值的表示和判定 GB/T14506.1硅酸盐岩石化学分析方法第1部分：吸附水量测定 3术语和定义 3.1 脱霉剂moldremover 能够有效消除或去除饲料中霉菌毒素的添加剂。 3.2 模拟胃（肠）液simulatesgastric(intestinal)fluid 使用盐、水和盐酸配制特定pH值的缓冲溶液，用以模拟胃（肠）液中的部分成分和pH条件。 4检测方法 4.1原理 试样与毒素在模拟胃（肠）液的环境中，进行孵育振荡，模拟吸附过程。使用高效液相色谱检测吸 附前后体系上清液中毒素的峰面积值，计算得到试样对该毒素的吸附率。 4.2试剂与材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级用水。 4.2.1试剂 4.2.1.1甲醇：色谱级。 全国团体标准信息平台 T/XYATB007-2023 34.2.1.2乙腈：色谱级。 4.2.1.3乙酸：色谱级。 4.2.1.4氯化钠。 4.2.1.5十二水合磷酸氢二钠。 4.2.1.6磷酸二氢钾。 4.2.1.7氯化钾。 4.2.1.8次氯酸钠。 4.2.1.9盐酸。 4.2.1.10磷酸。 4.2.1.11二水合磷酸二氢钠。 4.2.1.12邻苯二甲醛。 4.2.1.132-巯基乙醇。 4.2.1.14硼砂。 4.2.2材料 4.2.2.1离心管：规格10mL。 4.2.2.2针筒：10mL。 4.2.2.3针头式过滤器：带0.22μm有机相滤膜。 4.2.2.4有机相微孔滤膜：0.45μm。 4.2.3试剂配制 4.2.3.1甲醇-水溶液（80+20）：取800mL甲醇加入200mL水，混匀，过0.45μm滤膜，超声 脱气，现用现配。 4.2.3.2甲醇-水溶液（70+30）：取700mL甲醇加入300mL水，混匀，过0.45μm滤膜，超声 脱气，现用现配。 4.2.3.3乙腈-水溶液（12+88）：取120mL乙腈加入880mL水，混匀，过0.45μm滤膜，超声 脱气，现用现配。 4.2.3.4乙酸-甲醇-水溶液（2+70+30）：取20mL乙酸和700mL甲醇，加入300mL水，混匀， 过0.45μm滤膜，超声脱气，现用现配。 4.2.3.5甲醇-0.1mol/L磷酸二氢钠水溶液（77+23）：取770mL甲醇与230mL二水合磷酸二氢 钠水溶液（0.1mol/L）混匀，用磷酸调节pH值为3.3～4.0，过0.45μm滤膜，超声脱气，现用现配。 4.2.3.6衍生液：准确称取20mg邻苯二甲醛，溶于1mL甲醇中，加入5mL硼砂溶液（0.1mol/L） 和50μL2-巯基乙醇，混匀，装入棕色瓶中，现用现配。 4.2.3.71.5mol/L盐酸溶液：量取12.5mL盐酸，用水稀释至100mL，混匀。 4.2.3.810×PBS缓冲液（以下简称模拟胃液）：称取80g氯化钠、2g氯化钾、2g磷酸二氢 钾和29.2g十二水合磷酸氢二钠，加入900mL水溶解，以1.5mol/L盐酸溶液调整至pH=3，然后加 水稀释定容定容至1L，混匀作为模拟胃液。 4.2.3.910×PBS缓冲液（以下简称模拟肠液）：称取80g氯化钠、2g氯化钾、2g磷酸二氢 全国团体标准信息平台 T/XYATB007-2023 4钾和29.2g十二水合磷酸氢二钠，加入900mL水溶解，以1.5mol/L盐酸溶液调整至pH=6.5，然后 加水稀释定容定容至1L，混匀作为模拟肠液。 4.2.4标准品 4.2.4.1黄曲霉毒素B1标准溶液：有证，纯度≥98%，高效液相色谱图见附录A。 4.2.4.2玉米赤霉烯酮标准溶液：有证，纯度≥98%，高效液相色谱图见附录A。 4.2.4.3呕吐毒素标准溶液：有证，纯度≥98%，高效液相色谱图见附录A。 4.2.4.4伏马毒素B1标准溶液：有证，纯度≥98%，高效液相色谱图见附录A。 4.2.4.5赭曲霉毒素A标准溶液：有证，纯度≥98%，高效液相色谱图见附录A。 4.2.5标准储备液配制 4.2.5.1黄曲霉毒素B1标准储备液（10μg/mL）：取黄曲霉毒素B1标准溶液，用甲醇稀释成浓度为 10μg/mL的标准储备液。密封后避光在-20℃下保存，备用，有效期6个月。 4.2.5.2玉米赤霉烯酮标准储备液（100μg/mL）：取玉米赤霉烯酮标准溶液，用甲醇稀释成浓度为 100μg/mL的标准储备液。密封后避光在-20℃下保存，备用，有效期12个月。 4.2.5.3呕吐毒素标准储备液（100μg/mL）：取呕吐毒素标准溶液，用甲醇稀释成浓度为100μg/mL 的标准储备液。密封后避光在-20℃下保存，备用，有效期6个月。 4.2.5.4伏马毒素B1标准储备液（100μg/mL）：取伏马毒素B1标准溶液，用甲醇稀释成浓度为100 μg/mL的标准储备液。密封后避光在-20℃下保存，备用，有效期6个月。 4.2.5.5赭曲霉毒素A标准储备液（10μg/mL）：取赭曲霉毒素A标准溶液，用甲醇稀释成浓度为 10μg/mL的标准储备液。密封后避光在-20℃下保存，备用，有效期12个月。 4.3仪器和设备 4.3.1分析天平：感量0.01g和0.0001g。 4.3.2涡旋混合器。 4.3.3离心机：转速可达到10000r/min。 4.3.4液相色谱仪：配紫外检测器和荧光检测器。 4.3.5移液器：量程10μL～100μL,20μL～200μL,100μL～1000μL。 4.3.6恒温水浴摇床：转速可达到200r/min。 4.3.7pH计（精度0.01)。 4.4试验 4.4.1制样 4.4.1.1黄曲霉毒素B1胃（肠）液吸附试验组（50ng/mL） 准确称取0.02g（精确至0.0001g）脱霉剂试样置于50mL三角瓶中，加入8.95mL水，0.05mL黄 曲霉毒素B1标准储备液（4.2.5.1）和1mL模拟胃（肠）液，混匀，用封口膜封口；于37℃恒温水浴 摇床中200r/min振荡60min，转移至离心管中，放入高速离心机10000r/min离心5min。转移上清液， 过0.22μm滤膜后收集滤液于进样瓶中以备进样。同时以相同条件制备空白组。 全国团体标准信息平台 T/XYATB007-2023 54.4.1.2玉米赤霉烯酮胃（肠）液吸附试验组（500ng/mL） 准确称取0.02g（精确至0.0001g）脱霉剂试样置于50mL三角瓶中，加入8.95mL水，0.05mL玉 米赤霉烯酮标准储备液（4.2.5.2）和1mL模拟胃（肠）液，混匀，用封口膜封口；于37℃恒温水浴摇 床中200r/min振荡60min，转移至离心管中，放入高速离心机10000r/min离心5min。转移上清液， 于进样瓶中以备进样。同时以相同条件制备空白组。 4.4.1.3呕吐毒素胃（肠）液吸附试验组（1000ng/mL） 准确称取0.02g（精确至0.0001g）脱霉剂试样置于50mL三角瓶中，加入8.9mL水，0.1mL呕 吐毒素标准储备液（4.2.5.3）和1mL模拟胃（肠）液，混匀，用封口膜封口；于37℃恒温水浴摇床中 200r/min振荡60min，转移至离心管中，放入高速离心机10000r/min离心5min。转移上清液，过0.22 μm滤膜后收集滤液于进样瓶中以备进样。同时以相同条件制备空白组。 4.4.1.4伏马毒素B1胃（肠）液吸附试验组（1000ng/mL） 准确称取0.02g（精确至0.0001g）脱霉剂试样置于50mL三角瓶中，加入8.9mL水，0.1mL伏马毒素B1 标准储备液（4.2.5.4）和1mL模拟胃（肠）液，混匀，用封口膜封口；于37℃恒温水浴摇床