ICS 65.020.20 B 31 DB45 广 西 壮 族 自 治 区 地 方 标 准 DB 45/T 1768—2018 慈姑组培苗生产技术规程 Technical specification for tissue culture seedling of Sagittaria sagittifolia L. 2018 - 05 - 10 发布 广西壮族自治区质量技术监督局 2018 - 06 - 10 实施 发 布 — DB45/T 1768 2018 目 次 前 言 ............................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 术语和定义 ........................................................................ 1 4 生产设备和灭菌 .................................................................... 1 5 生产工艺流程 ...................................................................... 1 6 生产操作 .......................................................................... 2 7 组培苗质量要求 .................................................................... 3 8 生产记录及档案建立 ................................................................ 4 附录 A（资料性附录） 培养基及培养条件 ................................................ 5 I — DB45/T 1768 2018 II — DB45/T 1768 2018 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由广西壮族自治区农业科学院提出。 本标准起草单位：广西农业科学院生物技术研究所。 本标准主要起草人：高美萍、江文、韦绍龙、颜梅新、张尚文、何芳练、董伟清、蒋慧萍、黄诗宇、 张驰、王艳、陈丽娟、蔡炳华、闭志强。 III — DB45/T 1768 2018 慈姑组培苗生产技术规程 1 范围 本标准规定了慈姑（Sagittaria sagittifolia L.）组培苗生产的术语和定义、生产设备和灭菌、 生产工艺流程、生产操作、组培苗变异筛选及控制、组培苗质量要求、生产记录及档案建立等技术要求。 本标准适用于广西境内慈姑组培苗的生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 NY/T 2306 花卉种苗组培快繁技术规程 DB45/T 1655 芋头组培苗生产技术规程 3 术语和定义 DB45/T 1655界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 慈姑 sagittaria sagittifolia L. 又称茨菰、剪刀草、燕尾草。具异形叶性, 以膨大地下球茎作蔬菜食用的泽泻科慈姑属宿根性水生 草本作物。 4 生产设备和灭菌 按NY/T 2306的规定执行。 5 生产工艺流程 生产工艺流程见图1。 1 — DB45/T 1768 2018 培养基的配置、保存与分装 ↓ 外植体选择 ↓ 采集与处理 接种 ↓ 初代培养 ↓ 继代培养 ↓ 生根培养 ↓ 炼苗 ↓ 出圃 图1 组培苗生产工艺流程图 6 生产操作 6.1 培养基 6.1.1 母液的配制与保存 按DB45/T 1655的规定执行。 6.1.2 分装 或 × 聚丙烯培 消毒盒 盖 经 ℃ in 压蒸汽消毒 室温凝固 即 或 放3 d～ 使 检查 无污染 得使 污染 加热溶解后趁热按每瓶（袋）33 mL～40 mL的量分装至250 mL的培养瓶（ 100 mm 120 mm 养袋） 瓶（袋装 ） ， 121 20 m 高 ,于 ， 用， 存 5 。存 后的培养基， 用前，应 有 ，不 用有 的培养基。 中并封好 d 放 6.2 外植体采集与处理 6.2.1 采集 宜选用品种纯正、遗传性状稳定、优质高产的无污染母本园或母株。切取生长健壮、无病虫害的球 茎的顶芽或匍匐茎茎尖生长点作为外植体。 6.2.2 灭菌 6.2.2.1 预处理 将采集的球茎顶芽或匍匐茎茎尖放入加有0.2％～0.5％洗衣粉温水中浸泡30 min，用自来水冲洗 2～3遍，剪取所需幼芽茎段（2 cm～3 cm），置于接种室中晾5 min～10 min。 2 — DB45/T 1768 2018 6.2.2.2 球茎顶芽灭菌 在超净台上，将经预处理的慈姑球茎顶芽截取直径3 mm～5 mm，长10 mm～20 mm茎尖段放入烧杯中， 倒入75％的酒精浸没，轻轻摇晃1 min，倒出酒精，用无菌水冲洗外植体2～3遍。再用0.1％的升汞消毒 10 min～15 min或2％次氯酸钠浸泡10 min～15 min，然后用无菌水冲洗3～5遍后，沥干封存于经灭菌的 培养瓶内供接种用。 6.2.2.3 匍匐茎茎尖灭菌 在超净台上，将经预处理的慈姑匍匐茎截取直径3 mm～5 mm，长5 mm～10 mm茎段尖放入烧杯中，倒 入75％的酒精浸没，轻轻摇晃10 s～30 s，倒出酒精，用无菌水冲洗外植体3～5遍。再用0.1％的升汞消 毒8 min～10 min或2％次氯酸钠浸泡8 min～10 min，然后用无菌水冲洗3～5遍后，沥干封存于经灭菌的 培养瓶内供接种用。 6.3 接种和增殖培养 6.3.1 初代培养（萌发培养） 在无菌垫纸（或铝片）上切取经消毒处理的3 mm～5 mm的外植体，接种在初代培养基上（参照附录A）， 培养7 d～10 d后，选择无污染且已萌芽的外植体再进行继代培养。 6.3.2 继代培养 将经初代培养所得外植体分切成带有2～3个芽点的小块，转接到继代培养基上（参照附录A）。28 d 为一个继代周期，继代次数宜控制在10代以内，增值系数宜控制在2.0～5.0以内。 6.4 生根和炼苗 6.4.1 生根培养 将继代苗接种在生根培养基上（参照附录A），培养10 d～15 d，苗高5 cm～8 cm，茎粗壮，根系发 达，即可转移到炼苗大棚培养。 6.4.2 炼苗 将组培苗转移到自然散射光下，常温（15 ℃～35 ℃）的大棚，炼苗20 d～30 d后,及时淘汰具有： 植株失绿、叶片畸形扭曲、分蘖叶片细弱，呈丛生状、匍匐茎明显过长，植株矮小、生根数少等症状的 变异株，即可出圃种植。 7 组培苗质量要求 组培苗无污染，植株生长形态正常无变异，质量应符合表1的要求。 表1 组培苗质量要求 指标名称 指标值 株高(cm) ≥8.0 茎粗（cm） ≥0.3 单株叶片数 ≥3 生根数(条) ≥5 3 — DB45/T 1768 2018 表 1 组培苗质量要求 （续） 指标名称 指标值 根长（cm） ≥3.0 植株叶色 浅绿色→浓绿 变异率（％） ≤3.0％ 8 生产记录及档案建立 应建立生产记录档案，生产记录宜包括：母液配制及培养基配制记录、培养基高压蒸汽灭菌工作记 录、员工接种工作记录、组培材料继代和生根入出库记录、品种材料生产档案和产品销售记录。 4 — DB45/T 1768 2018 AA 附 录 A （资料性附录） 培养基及培养条件 各类培养基及培养条件见下表A.1。 表A.1 培养基及培养条件 培养基名称 初代培养基 继代培养基 生根培养基 成分 培养条件 1/2MS＋6-BA0.5 mg/L～1.0 mg/L＋NAA 0.01 mg/L～ 温度（26±2） ℃，光照1 500 Lx～2 000 Lx，光照 0.05 mg/L＋蔗糖30 g/L 16 h MS＋6-BA2.0 mg/L～3.5 mg/L＋NAA0.1 mg/L～0.5 温度（26±2） ℃，光照1 500 Lx～3 000 Lx，光照 mg/L＋蔗糖30 g/L 12 h MS＋6-BA0.5 mg/L～1.0 mg/L＋NAA 0.5 mg/L～1.0 温度（28±2） ℃，光照1 500 Lx～2 000 Lx，光照 mg/L＋蔗糖30 g/L 8h B ___________________ 5 中华人民共和国广西地方标准 慈姑组培苗生产技术规程 DB45/T 1768―2018 广西壮族自治区质量技术监督局统一印刷 版权专有 侵权必究