(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111312839.5 (22)申请日 2021.11.08 (83)生物保 藏信息 CGMCC NO.23040 2021.10.14 (71)申请人 华东师范大学 地址 200241 上海市闵行区东川路5 00号 (72)发明人 李晓涛　张变红　张丽丽　童璐　 李磊　 (74)专利代理 机构 上海德禾翰通 律师事务所 31319 代理人 夏思秋 (51)Int.Cl. C07K 16/18(2006.01) C07K 1/22(2006.01) C12N 5/20(2006.01)C12N 15/13(2006.01) C12N 15/85(2006.01) G01N 33/577(2006.01) G01N 33/574(2006.01) A61K 39/395(2006.01) A61P 35/00(2006.01) C12R 1/91(2006.01) (54)发明名称 一种针对抗RE Gγ全长蛋白的重组单克隆抗 体及其制备方法和应用 (57)摘要 本发明提供了一种抗REGγ蛋白的重组单克 隆抗体， 所述抗体包括重链可变区和轻链可变 区。 所述的重链可变区的核苷 酸序列和氨基酸序 列分别如SEQ  ID NO:1和SEQ  ID NO:3所示， 所述 的轻链可变区的核苷酸序列和氨基酸序列分别 如SEQ ID NO:2和SEQ  ID NO:4所示。 本发明将携 带重组抗体基因的轻链和重链真核表达质粒共 转染到HE K293T细胞， 进行表 达纯化。 用抗REGγC 末端区域的单克隆抗体作为对照抗体， 利用 WesternBlot、 细胞免疫荧光、 免疫组化技术、 ELISA技术对本发明抗体进行性能评价。 结果显 示本发明重组单克隆抗体具有特异性强、 灵敏度 高、 稳定性强、 不依赖动物生产、 适合量化生产等 优点， 为以过表达REGγ蛋白作为疾病的诊断与 治疗靶标提供有效的工具。 权利要求书2页 说明书14页 序列表12页 附图8页 CN 114106169 A 2022.03.01 CN 114106169 A 1.一种抗REGγ 蛋白的重组单克隆抗体， 其特征在于， 所述抗体包括重链可变区和轻链 可变区； 所述的重链可变区的核苷酸序列和氨基酸序列分别如SEQ  ID NO:1和SEQ  ID NO:3所 示， 或与SEQ  ID NO： 1或SEQ  ID NO： 3具有至少85％、 至少86％、 至少87％、 至少88％、 至少 89％、 至少90％、 至少91 ％、 至少92％、 至少93％、 至少94％、 至少95％、 至少96％、 至少97％、 至少98％、 至少9 9％以上的序列一 致性； 所述的轻链可变区的核苷酸序列和氨基酸序列分别如SEQ  ID NO:2和SEQ  ID NO:4所 示， 或与SEQ  ID NO： 2或SEQ  ID NO： 4具有至少85％、 至少86％、 至少87％、 至少88％、 至少 89％、 至少90％、 至少91 ％、 至少92％、 至少93％、 至少94％、 至少95％、 至少96％、 至少97％、 至少98％、 至少9 9％以上的序列一 致性。 2.如权利要求1所述的抗REGγ蛋白的重组单克隆抗体， 其特征在于， 所述的重链可变 区的核苷酸序列和氨基酸序列分别如SEQ  ID NO:1和SEQ  ID NO:3所示； 和/或， 所述的轻链可变区的核苷酸序列和氨基酸序列分别如SEQ  ID NO:2和SEQ  ID  NO:4所示。 3.如权利要求1或2所述的抗REGγ蛋白的重组单克隆抗体， 其特征在于， 所述重组单克 隆抗体识别的抗原决定 簇位于IgG的重链和轻链可变区。 4.如权利要求1或2所述的抗REGγ蛋白的重组单克隆抗体， 其特征在于， 所述重组单克 隆抗体与REGγ抗原特异性结合， 不结合 其同源蛋白REGα 。 5.如权利要求1或2所述的抗REGγ蛋白的重组单克隆抗体， 其特征在于， 所述重组单克 隆抗体为全长抗体。 6.一种细胞系， 其特征在于， 高表达、 稳定分泌如权利要求1或2所述的抗REGγ蛋白的 重组单克隆抗体。 7.如权利要求6所述的细胞系， 其特 征在于， 所述细胞系为哺乳动物细胞系。 8.如权利要求6所述的细胞系， 其特征在于， 所述细胞系为融合杂交瘤细胞， 命名为Mc ‑ IgG‑REGγ‑R2杂交瘤细胞株， 保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心 CGMCC， 保藏编号 为CGMCC No.23040， 保藏时间为2021年10月14日。 9.如权利要求8所述的细胞系， 其特征在于， 所述融合杂交瘤细胞是由原核表达的GST ‑ REGγ蛋白免疫 小鼠后的脾脏细胞和骨髓瘤 细胞融合得到 。 10.如权利要求9所述的细胞系， 其特 征在于， 所述骨髓瘤 细胞为SP2/0。 11.如权利要求1或2所述的抗REGγ蛋白的重组单克隆抗体是根据如权利要求6所述细 胞系测序得到的。 12.一种质粒载体， 其特征在于， 所述质粒载体含有如权利要求1中所述的轻链核苷酸 序列或重链核苷酸序列； 所述质粒 载体为分泌型。 13.一种抗REGγ蛋白的重组单 克隆抗体的制备 方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： (a)通过LIC ‑PCR技术将如权利 要求1中所述的轻链核苷酸序列和重链核苷酸序列分别 构建到真核表达载体pLEXM； (b)将所述步骤(a)中真核表达载体共转染到HEK  293T细胞表达， 经纯化得到抗REGγ 蛋白的重组单 克隆抗体。 14.一种体外诊断试剂 或药物组合物， 其特征在于， 所述体外诊断试剂或者药物组合物权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114106169 A 2包含如权利要求 1或2所述的抗 REGγ蛋白的重组单克隆抗体， 或编码所述的抗 REGγ蛋白的 重组单克隆抗体的基因序列， 以及药 学上可接受的载体或赋 形剂； 所述重组单 克隆抗体的片段保留所述完整抗体的抗原结合活性。 15.一种体外诊断试剂 或药物组合物， 其特征在于， 所述体外诊断试剂或者药物组合物 还包括结合剂， 所述结合剂识别如权利要求1或2所述的抗REGγ蛋白的重组单克隆抗体识 别的抗原 表位； 所述 抗原表位的物种交叉反应性包括人、 小鼠。 16.如权利要求1或2所述的抗REGγ蛋白的重组单克隆抗体在制备诊断与治疗以REGγ 高表达为靶标的相关疾病的药物和/或产品中的应用。 17.如权利要求16所述的应用， 其特征在于， 所述疾病包括结肠癌、 肺癌、 甲状腺癌、 皮 肤癌、 乳腺癌、 肝癌。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114106169 A 3