(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111286130.2 (22)申请日 2021.11.02 (71)申请人 中国人民解 放军空军 军医大学 地址 710000 陕西省西安市新城区长乐西 路169号 (72)发明人 秦卫军　张克英　韩东晖　温伟红　 李宇　王经纬　杨发　许超　 刘少杰　 (74)专利代理 机构 西安众和至成知识产权代理 事务所(普通 合伙) 61249 代理人 强宏超 (51)Int.Cl. A61K 9/51(2006.01) A61K 41/00(2020.01) A61K 45/00(2006.01)A61K 49/00(2006.01) A61K 49/04(2006.01) A61K 49/18(2006.01) A61P 13/08(2006.01) A61P 19/08(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 35/04(2006.01) C12N 15/867(2006.01) C12N 15/62(2006.01) (54)发明名称 一种靶向PSMA的巨噬细胞膜包裹的仿生纳 米药物载体及应用 (57)摘要 本发明公开了一种靶向PSMA的巨噬细胞膜 包裹的仿生纳米药物载体及应用， 将巨噬细胞膜 包裹纳米金载体， 其中巨噬细胞膜上跨膜表达基 于SEQ.ID.NO.1所示序列的靶向PSMA的抗体； 该 抗体为gy ‑1单链抗体， 通过与CD8a铰链区和CD8a 跨膜区的融合表达使其跨膜表达于巨噬细胞膜 上。 本发明利用基因工程的方法， 构建表达跨膜 单链抗体的慢病毒载体， 包装成慢病毒后用于感 染巨噬细胞使其表达跨膜单链抗体， 提取此细胞 膜进行纳米载体的仿生化修饰； 所制备的纳米载 体有望克服传统纳米药物载体外源性强、 靶向性 弱这两大难题， 可用于前列腺癌的靶向诊疗试 剂、 药物的制备。 权利要求书1页 说明书8页 序列表1页 附图6页 CN 114306277 A 2022.04.12 CN 114306277 A 1.一种靶向PSMA的巨噬细胞膜包裹的仿生纳米药物载体， 其特征在于， 将巨噬细胞膜 包裹纳米金载体， 其中巨噬细胞膜上跨膜表达基于SEQ.ID.NO.1所示的序列的靶向PSMA的 抗体； 该抗体为gy ‑1单链抗体， 通过与CD8a铰链区、 CD8a跨膜区的融合表达使其跨膜表达于 巨噬细胞膜上。 2.如权利要求1所述的靶向PSMA的巨噬细胞膜包裹的仿生纳米药物载体， 其特征在于， 所述巨噬细胞膜上跨膜表达的靶向PS MA的单链抗体， 由慢病毒感染巨噬细胞并表达之后提 取细胞膜而得； 所述慢病毒是由重组GV 218慢病毒载体以慢病毒三质粒系统包 装而得； 所述重组GV 218慢病毒载体中含有SEQ.ID.NO.1所示的基因片段。 3.如权利要求1所述的靶向PSMA的巨噬细胞膜包裹的仿生纳米药物载体， 其特征在于， 所述的纳米金 载体为核壳结构的F e3O4@Au纳米粒； 巨噬细胞膜与纳米粒的质量比为2:1～10:1； 两者经超声分散、 脂质体挤出器反复挤压而实现包裹。 4.一种靶向PSMA的跨膜抗体表达载体， 其特征在于， 该载体为重组GV218慢病毒载体， 其中含有SEQ.ID.NO.1所示的基因片段。 5.权利要求1所述的靶向PSMA的巨噬细胞膜包裹的仿生纳米药物载体在制备前列腺癌 诊断试剂、 药物中的应用。 6.权利要求4所述的靶向PSMA的跨膜抗体表达载体在制备前列腺癌诊断试剂、 药物中 的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114306277 A 2一种靶向PSMA的巨噬细胞膜包裹的仿生纳米药物载体及应用 技术领域 [0001]本发明属于生物靶向技术领域， 涉及针对前列腺癌的特异性靶向， 特别涉及一种 靶向PSMA的 巨噬细胞膜包裹的仿生纳米药物载体及应用。 技术背景 [0002]纳米医学被认为是21世纪最有前景的抗肿瘤策略之一， 逐渐成为肿瘤新药研发的 热点和焦点，  其中纳米药物载体不仅能够通过多样、 可靠的载药方式， 增加药物递送的稳 定性、 改善药物的水溶  性； 还有望将抗肿瘤活性好但药代动力学差的药物纳入备选范畴， 增加临床用药的灵活性， 为肿瘤  的临床诊疗提供新动力。 然而， 传统的纳米药物递送系统， 如FDA批准的脂质体、 高分子聚合物、  白蛋白等， 均存在 “外源性强 ”、“靶向性差 ”这两个关 键的瓶颈问题。 [0003]首先， 传统纳米载体作为外源性物质， 进入人体后会被单核巨噬细胞系统识别清 除或通过吸附  血清蛋白间接激活免疫系统而被清除； 其次， 尽管肿瘤血管具有结构特殊、 渗透性高的特点， 使得  肿瘤组织具有增强的渗透和保留(Enhanced  permeation  and  retention,EPR)效应， 可使纳米载体在肿  瘤组织有一定程度的富集， 然而EPR效应获得的 特异性仍不够理想； 研究表明， 只有0.7％注射剂量  的纳米颗粒可达到肿瘤组织， 考虑到纳 米颗粒还需要穿过细胞外基质等层层屏障， 因此真正到达肿  瘤细胞的量可能还不到 0.7％。 因此， 急需探索并发明减少外源性而增强靶向性的新型纳米药物 递送 系统， 以促进 其临床转 化并增强药物的临床疗效。 [0004]为了克服上述传统纳 米药物递送系统的两个瓶颈问题， 国内外学者进行了广泛探 索。 首先， 针  对“外源性强 ”的难题， 可使用聚乙二醇(Polyethylene  glycol,PEG)对纳米载 体进行表面改性， 利用  PEG在纳米载体表面形成的一层水化膜， 可以有效避免巨噬细胞与 其接触， 从而实现免疫逃逸。 所  以， PEG化逐渐成为纳米载体表面修饰的主要策 略。 然而后 续研究表明， 首次注射这种PEG化的纳  米载体后， 机体会产生 “抗PEG”的免疫反应， 再次注 射时PEG化的纳米载体仍然会被快速清除。 [0005]近年来新兴的细胞膜仿生纳米技术可更有效地克服纳 米载体的“外源性”难题。 通 过提取红细胞  膜并将其包覆于纳米载体表面， 能够通过 “自上而下 ”的方式使其获得红细 胞表面的脂类分子和膜蛋  白， 从而实现 “类细胞样 ”的伪装和逃避 单核巨噬系统的清除， 并 且与PEG修饰相比， 这种仿生化修  饰的纳米载体在血液中的循环时间明显延长。 红细胞具 有数量丰富、 易获取、 没有细胞器容易提取  细胞膜等特点， 使得红细胞膜成为纳米载体仿 生化修饰中最常用的一类细胞膜。 然而， 由于红细胞  无法实现外源基因的转染和表达， 难 以实现靶向性， 因此其进一步应用也受到了很大限制。 与红细  胞膜相比， 巨噬细胞膜可能 更具优势： 一方面巨噬细胞是介导免疫清除的主要细胞， 因此使用巨噬  细胞膜进 行仿生化 修饰可望获得更好的伪装效果， 从而更有效地逃避免疫清除； 另一方面， 巨噬细  胞具备完 成的亚细胞 结构， 拥有外源基因的转染、 表达及可细胞膜进行靶向改造等基础条件。 [0006]其次是“靶向性差 ”的难题。 虽然巨噬细胞仿生纳 米技术能够有效克服传统纳 米载说　明　书 1/8 页 3 CN 114306277 A 3