(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111411201.7 (22)申请日 2021.11.25 (71)申请人 瑞莱茵 （北京） 生物科技有限责任公 司 地址 100094 北京市海淀区永丰屯5 38号1 号楼1层140 /142室 申请人 中科瑞莱茵 （北京） 生物科技有限公 司　 瑞莱因 （北京） 生物化学研究所 (72)发明人 方令豪　舒庆艳　 (74)专利代理 机构 北京汉智嘉成知识产权代理 有限公司 1 1682 代理人 高芬芳　金洁 (51)Int.Cl. A61K 36/258(2006.01)A61K 31/704(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 人参发酵提取物及其制备方法 (57)摘要 本发明公开了人参发酵提取物及其制备方 法。 本发明所提供的人参发酵提取物源自用包含 黑曲霉菌株(Aspergillus  niger ATCC 1015)的 发 酵 液 发 酵的 人 参 (Pa n a x  g i n s e n g   C.A.Meyer)； 所述人参发酵提取物包含下述化合 物中的一种或多种： 人参皂苷Rh1、 人参皂苷Y、 2 0 (S)‑达玛‑3β,6α,12β,20,25 ‑五醇、 20(S) ‑达 玛‑3β,12β,20,25 ‑四醇、 20(S) ‑达玛‑3β,6 α,12β,2 0,24‑五醇。 本发明将人参通过黑曲霉 菌株(Aspergillusniger  ATCC 1015)发酵后， 产 生了稀有人参皂苷以及一些在人参中首次报道 的人参皂苷和三萜皂苷元成分。 权利要求书1页 说明书5页 附图2页 CN 113940952 A 2022.01.18 CN 113940952 A 1.人参发酵提取物， 其特征在于： 所述人参发酵提取物源自用包含黑曲霉菌株 (Aspergillus  niger ATCC 1015)的发酵液发酵的人参(Panax  ginseng C.A.Meyer)； 所述 人参发酵提取物包含 下述化合物中的一种或多种： 人参皂苷Rh1、 人参皂苷Y、 20(S) ‑达玛‑3 β,6α,12β,20,25 ‑五醇、 20(S) ‑达玛‑3β,12β,20,25 ‑四醇、 20(S) ‑达玛‑3β,6α,12β,20,24 ‑ 五醇。 2.根据权利要求1所述的人参发酵提取物， 其特征在于： 所述人参发酵提取物是醇提取 物并且经 过大孔吸附树脂纯化。 3.人参发酵提取物的制备 方法， 包括如下步骤： (1)发酵： 将包含黑曲霉菌株(Aspergillus  niger ATCC 1015)的发酵液接种到人参 上， 进行发酵培 养， 得到人参发酵物； (2)提取： 将步骤(1)得到的人参发酵物用醇提取， 即得到所述人参发酵提取物。 4.根据权利要求3所述的人参发酵提取物的制备方法， 其特征在于： 在所述发酵前， 还 包括使用发酵培养基对所述黑曲霉菌株(Aspergillus  niger ATCC1015)进行发酵培养的 步骤。 5.根据权利要求3或4所述的人参发酵提取物的制备方法， 其特征在于： 在所述发酵前， 还包括对人参进行灭菌和/或粉碎的步骤。 6.根据权利要求3或4所述的人参发酵提取物的制备方法， 其特征在于： 在所述提取后， 还包括使用大孔吸附树脂对所述人参发酵提取物进行 纯化的步骤。 7.根据权利要求6所述的人参发酵提取物的制备方法， 其特征在于： 将步骤(2)得到的 人参发酵提取物经过浓缩后， 使用非极性大孔吸附树脂层析柱和体积百分比浓度80％的乙 醇作为洗脱剂进行 纯化， 将乙醇洗脱液浓 缩干燥后， 即得 纯化的人参发酵提取物。 8.由权利要求3～7中任一所述的方法制备 得到的人参发酵提取物。 9.纯化的人参发酵提取物， 包含下述32种化合物： 20(S) ‑原人参三醇、 20(S) ‑原人参二 醇、 20(R)‑达玛‑24‑烯‑6α,12β,2 0,25‑四羟基‑3‑酮、 人参皂苷C K、 20(S)‑异人参皂苷 ‑Rh3、 人参皂苷Rh1、 人参皂苷F1、 人参皂苷Rg1、 人参皂苷Y、 人参皂苷Rd、 人参皂苷la、 人参皂苷 Rg2、 三七皂苷Fe、 人参皂苷Re、 人参皂苷Rb2、 人参皂苷Rb1、 20(R) ‑达玛‑6α,12β,20,25 ‑四 羟基‑3‑酮、 20(S) ‑达玛‑3β,6α,12β,20,2 5‑五醇、 20(S) ‑达玛‑3β,12β,20,25 ‑四醇、 20(R)‑ 达玛‑3β,6α,12β,20,25 ‑五醇、 20(S) ‑达玛‑3β,12β,20,25 ‑四醇‑6‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷、 20(S)‑达玛‑3β,12β,20,25 ‑四醇‑6‑O‑α‑L‑吡喃鼠李糖基 ‑(1→2)‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷、 20(S)‑达玛‑3β,12β,20,25 ‑三醇‑3‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖基 ‑(1→2)‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷、 20(S)‑达玛‑25(26)‑烯‑3β,6α,12β,20,24 ‑五醇、 20(S) ‑达玛‑3β,6α,12β,20,24 ‑五醇、 20 (R)‑达玛‑24(25)‑环氧‑3β,6α,12β,20 ‑四醇、 人参皂苷Rh4、 人参皂苷Rk2、 (20S,23E) ‑达 玛‑23‑烯‑3β,6α,12β,20,25 ‑五醇、 人参皂苷Rh3、 拟人参皂苷RT5、 27 ‑去甲基‑(E,E)‑20 (22),23‑二烯‑3β,6α,12β ‑三羟基‑达玛‑25‑酮。 10.权利要求1所述的人参发酵提取物、 权利要求8所述的人参发酵提取物或权利要求9 所述的纯化的人参发酵提取物在制备抗肿瘤活性的产品中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113940952 A 2人参发酵提取物及其制备方 法 技术领域 [0001]本发明涉及提取物及其制备 方法， 特别地涉及人参发酵提取物及其制备 方法。 背景技术 [0002]五加科(Araliaceae)人参属 植物在全世界共有8个种和3个变种。 其中， 名贵中药 材人参(Panax  ginseng C.A.Meyer)主要产于中国东北及朝鲜半岛， 素有 “百草之王 ”的美 誉。 在中国、 韩国和日本被用作传统名贵中药材已经超过2000多年。 人参在东北三省已经广 泛栽培。 据 《神农本草经》 记载， 人参具有 “主补五脏， 安精神， 定魂魄， 止惊悸， 除邪气， 明目 益智， 久服轻身延年； 其干燥的根和根茎是法定的药用部位， 人参味甘、 微苦， 微温， 具有大 补元气、 复脉固脱、 补脾益肺、 生津养血、 安神益智的功效。 现代中医药学研究表明， 人参具 有抗肿瘤、 调节神经中枢神经系统、 调节免疫、 抗心 律失常、 抗溶血等多重药 理活性作用； 人 参具有降低血糖、 控制肝指数和肝功能、 调节荷尔蒙和调节血压等功能， 其主要的药用效果 是补充能量、 增强身体抵抗力、 增强免疫反应等功效。 目前公认人参皂苷为人参主要有效成 分。 [0003]迄今为止， 从人参根和根茎、 茎叶、 果实、 种子和果及人参的加工产品红参和黑参 中分离鉴定了230多个三萜类人参皂苷及其衍生物。 人参皂苷是 由人参皂苷苷元与糖基通 过糖苷键连接而成的糖苷类化合物， 尤其以三萜类皂苷为主要成分。 按人参皂苷的苷元结 构不同， 可分为四环三萜类的达玛烷型(dammarane ‑type， I型)、 奥科梯隆(ocotillol ‑ type， II型)和五环三萜的齐墩果 酸型(oleanene acid‑type， III型)三种类型(如图1)。 [0004]达玛烷型根据母核上的C ‑6位是否有羟基， 可分为原人参二醇(protopanaxadiol   type， PPD)和原人参三 醇型(protopanaxatriol  type， PPT)， 根据PPD和PPT的手性碳C ‑20又 进一步分为20(S)和20(R)型(如图2)。 [0005]研究表明， 人参皂苷具有诸多的生物活性： Rb1具有保护神经、 抗氧化、 雌激素样作 用， Rb2具有抑制肿瘤转移作用， Rc具有增强免疫力、 抗炎作用， Rd具有增强免疫力、 抗氧化、 保护心血管作用， Rg3具有抗肿瘤、 保护神经、 保护血管、 抗血小板凝聚作用， Rh2、 Rs3、 C ‑Mx、 DM1、 PM1、 SM1、 25 ‑OH‑PPD具有抗肿瘤作用； IH ‑902、 IH‑903具有抗遗传毒性作用； 人参皂苷 CK具有抗肿瘤、 抗遗传毒性作用， PPD具有增强免疫力作用； Re具有抑制增殖、 保护神经作 用， Rg1具有保护神经、 诱导细胞凋亡、 雌激素样作用， Rh1具有增强免疫力、 抑制增殖、 雌激 素样作用； P ‑F11具有保护神经作用； Rg5具有改善记忆障碍、 抗焦虑、 抗血小板凝聚， Rh3具 有诱导分化作用。 从以上人参皂苷单体成分各自的药理和药学活性可知， 人参皂苷作为人 参的主要有效成分之一。 [0006]从其生物活性可知， 人参皂苷的类型、 取代基、 糖的数量及构型等因素影响其抗肿 瘤活性。 人参皂苷不同母核类型活性大小为： 齐墩果酸型皂苷＞原人参二醇型皂苷＞原人 参三醇型皂苷。 随着皂苷中糖基数量增加， 人参皂苷抗癌活性降低， 原人参二醇型皂苷的活 性强度依次为： 25 ‑OHPPD>PPD>单糖皂苷>双糖皂苷>三糖皂苷>四