(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111343692.6 (22)申请日 2021.11.13 (71)申请人 广东暨创硒源纳米 研究院有限公司 地址 510535 广东省广州市黄埔区开源大 道206号101房 (72)发明人 李晓玲　陈填烽　刘婷　陈义康　 李海伟　 (74)专利代理 机构 广州睿金泽专利代理事务所 (普通合伙) 44430 代理人 余宏海 (51)Int.Cl. A61K 33/04(2006.01) A61K 47/59(2017.01) A61K 47/58(2017.01) A61K 47/61(2017.01)A61K 47/64(2017.01) A61K 35/17(2015.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 37/04(2006.01) A61K 31/155(2006.01) (54)发明名称 功能化纳米硒联合二甲双胍制备的NK细胞 增敏剂及应用 (57)摘要 本发明公开了功能化纳米硒联合二甲双胍 制备的NK细胞增敏剂以及应用。 是将功能化纳米 硒联合二甲双胍作为NK细胞增敏剂辅助NK细胞 进行应用。 所述功能化纳米硒为单独纳米硒， 聚 丙烯胺盐酸盐修饰的纳米硒， 聚乙烯吡咯烷酮修 饰的纳米硒， 吐温80修饰的纳米硒， 多糖修饰的 纳米硒， 叶酸修饰的肿瘤靶向性纳米硒和转铁蛋 白修饰的肿瘤靶向性纳米硒中的至少一种； 所述 NK细胞为NK ‑92细胞。 本发明的NK细胞增敏剂能 实现刺激NK细胞分泌更多的细胞因子从而提高 细胞治疗的抗肿瘤效果， 所得纳米硒增敏剂的原 料廉价易得， 合成和纯化步骤可操作性强， 适当 扩大合成规模， 实现药物的商业 化和应用。 权利要求书1页 说明书8页 附图9页 CN 114177194 A 2022.03.15 CN 114177194 A 1.功能化纳米硒联合 二甲双胍作为 NK细胞增敏剂的应用。 2.根据权利要求1所述功能化纳米硒联合二甲双胍作为NK细胞增敏剂的应用， 其特征 在于： 所述功能化纳米硒联合 二甲双胍作为 NK细胞增敏剂在抗肿瘤中的应用。 3.根据权利要求1所述功能化纳米硒联合二甲双胍作为NK细胞增敏剂的应用， 其特征 在于： 是所述功能化纳米硒联合 二甲双胍预 先与NK细胞孵 育一段时间再处 理肿瘤细胞； 或是所述功能化纳米硒联合 二甲双胍预处 理肿瘤细胞后再加入NK细胞； 或是所述功能化纳米硒联合 二甲双胍与NK细胞同时处 理肿瘤细胞。 4.根据权利要求2或3所述功能化纳米硒联合二甲双胍作为NK细胞增敏剂的应用， 其特 征在于： 所述肿瘤 包括人肝癌、 人非小细胞肺癌、 人宫颈癌、 黑色素瘤、 乳腺癌和脑胶质瘤中 的任意一种； 所述 NK细胞增敏剂是NK ‑92细胞增敏剂。 5.功能化纳米硒联合 二甲双胍制备NK细胞增敏剂的方法， 其特 征在于： 包括 步骤 制备功能化纳米硒； 加入二甲双胍进行混合反应， 得到NK细胞增敏剂。 6.根据权利要求5所述方法， 其特征在于： 所述功能化纳米硒为纳米硒、 聚烯丙基胺盐 酸盐(阿拉丁)修饰的纳米硒、 聚乙烯吡 咯烷酮修饰的纳米硒、 TW80修饰的纳米硒、 多糖修饰 的纳米硒、 叶酸 修饰的纳米硒、 转铁蛋白修饰的纳米硒中的至少一种。 7.根据权利要求5所述方法， 其特征在于： 制备功能化纳米硒通过如下任意一种方式制 备得到： 将H2SeO3溶液或Na2SeO3溶液与Vc混合均匀进行反应， 透析， 得到一种形态纳米硒(S ‑ SeNPs)； 或者是， 将H2SeO3溶液或Na2SeO3溶液与物质A混合均匀， 再加入Vc进行反应， 透析， 得到 不同的功能化纳米硒， 其中， 所述的物质A为PAH、 PVP、 TW80、 多糖、 叶酸、 转铁蛋白中的任意 一种； 或者是， 将物质A和Vc混合均匀， 再加入H2SeO3溶液或Na2SeO3溶液进行反应， 透析， 得到 不同的功能化纳米硒， 其中， 所述的物质A为PAH、 PVP、 TW80、 叶酸、 转铁蛋白中的任意 一种。 8.根据权利要求7 所述方法， 其特 征在于： 所述的H2SeO3溶液或Na2SeO3溶液的浓度为8～10 mmol/L； H2SeO3溶液或Na2SeO3溶液的添 加量为按终浓度1～5m mol/L计算； 所述的物质A的添加量 为按终浓度0.5～10mg/mL计算； 所述的Vc和H2SeO3按摩尔比3～10:1进行配比； 或者所述的Vc和Na2SeO3按摩尔比3～10: 1进行配比； 所述反应的温度是4℃～5℃， 反应时间为0.5～ 24小时； 所述的透析 方式为采用透析袋进行透析， 透析的时间为12 ～48小时。 9.一种NK细胞增敏剂， 其特征在于： 采用如权利要求5 ‑8任一项的方法得到的所述NK细 胞增敏剂。 10.一种抗肿瘤药物， 其特征在于： 包含权利要求5 ‑8任一项的方法得到的所述NK细胞 增敏剂、 以及NK细胞。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114177194 A 2功能化纳米硒联合 二甲双胍制备的NK细胞增敏剂及应用 技术领域 [0001]本发明属于医药化合物技术领域， 特别涉及功能化纳 米硒联合二甲双胍制备的NK 细胞增敏剂， 以及 在抗肿方面的应用。 背景技术 [0002]肝癌作为全球第六大常见癌症， 占癌症死亡率达11％。 糖尿病是一种以血糖和胰 岛素失调的代谢性疾病。 许多研究发现， 糖尿病患者 发病持续时间越长， 患有肝癌的风险越 大， 比无糖尿病患者的发病率高达2～3倍。 其可能的致癌机制为患者本身的高血糖症， 自身 的慢性炎症， 肥胖以及高胰岛素血症。 高血糖症可通过血红蛋白糖基化从而释放亚铁离子 (作为一种促氧化剂)， 产生自由基， 进而引起氧化应激； 自身的慢 性炎症可诱导肿瘤坏死 因 子(TNF‑α )和白介素 ‑6(IL‑6)的表达； 肥胖使 得人体对胰岛素敏感性降低， 为了维持一个正 常的胰岛素水平， 胰岛β 细胞会分泌更多的胰岛素， 造成高胰岛素血症， 并进一步影响与肝 细胞损伤、 炎症、 纤维化相关基质蛋白的表达； 这些复杂的病症降低了免疫系统功能， 并大 大提高肝癌的发生 率。 [0003]过继性免疫细胞治疗利用活体的免疫活性细胞在体外进行扩增后重新输入回去 病人体内， 这类免疫活性细胞能够直接或间接的杀伤肿瘤细胞。 过继性免疫细胞联合化疗 药物用于肿瘤的治疗， 能够增强免疫细胞的免疫敏感性， 提高免疫细胞敏感性受体的表达， 增强免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤效果。 自然杀伤(NK)细胞是机体重要的免疫细胞， 不仅与 抗肿瘤、 抗病毒感染和免疫调节有关， 而且在某些情况下参与超敏反应和自身免疫性疾病 的发生， 能够识别靶细胞、 杀伤介质。 [0004]NK‑92细胞是一种类似NK细胞活性 的免疫细胞， 具有NK细胞的主要特性以及主要 表达受体， 它能够大量表达参与穿孔素和颗粒酶过程的细胞因子以及肿瘤坏死因子如 FasL、 TRAIL、 TNF ‑α 等， 进而杀伤肿瘤细胞； 且NK ‑92细胞能够高效辨识并杀伤肿瘤细胞， 而 不影响正常细胞的生存， 这一特殊的机制尚不清楚， 但推测可能为NK ‑92细胞不表达NK细胞 上的免疫球蛋白样受体(KIR)导致的。 有研 究报道， 卡博替尼能够协同NK ‑92细胞对肾癌造 成更大的杀伤效果， 其中卡博替尼增加肿瘤细胞中E GFR的表达， 以及降低肿瘤细胞PD ‑L1的 表达， 逆转了免疫抑制。 因此， 化疗药物联合免疫细胞增强对肿瘤细胞的免疫治疗效果是一 个不错的治疗策略。 [0005]之前研究报道， SeNPs在正常细胞中具有抗氧化， 清除自由基的功能， 并能降低高 血糖症引起的氧化应激效果； 在抗肿瘤方面， 自身 具有杀伤肿瘤的效果， 并能够增强免疫细 胞杀伤肿瘤细胞。 二甲双胍(Metformin)作为T2DM一线临床用药， 能够降低血糖并具有一定 的抗肿瘤效果。 因此， 怎样复合二甲双 胍增强NK细胞的免疫治疗效果， 在结合纳米硒的化合 物提高治疗肿瘤的新应用领域， 寻找用于免疫治疗的纳米免疫治疗增敏剂是肿瘤治疗需要 进一步研究的。说　明　书 1/8 页 3 CN 114177194 A 3