(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111306428.5 (22)申请日 2021.11.05 (66)本国优先权数据 202011232115.5 2020.1 1.06 CN (71)申请人 百奥泰生物制药股份有限公司 地址 510530 广东省广州市广州高新 技术 产业开发区科学城开源 大道11号A6栋 第五层 (72)发明人 陈奕藩　梁秋莲　裴树军　俞金泉　 李胜峰　 (51)Int.Cl. C07K 16/46(2006.01) C12N 15/13(2006.01) A61K 39/395(2006.01) A61P 37/02(2006.01)A61P 29/00(2006.01) A61P 31/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 35/02(2006.01) (54)发明名称 双特异抗体及其应用 (57)摘要 本发明提供了双特异抗体及其应用， 本发 明 的双特异抗体或抗原结合片段可以结合两个或 更多个抗原， 或同一抗原的两个或更多个表位。 本发明抗体或抗原结合片段可以用于治疗各种 疾病， 比如炎性疾病、 自身免疫 性疾病、 癌症或脊 髓损伤， 也可以用于相关疾病的诊断和预后。 权利要求书3页 说明书59页 序列表46页 附图11页 CN 114437227 A 2022.05.06 CN 114437227 A 1.一种双特异抗体或抗原结合片段， 其特征在于， 所述抗体或抗原结合片段包含特异 性结合PD‑L1的可变区a； 其中， 所述可变区a包 含(a)‑(f)中一种或多种氨基酸序列： (a)VHa CDR1， 其包含如SEQ ID NO:4‑8中任一项所示的氨基酸序列； (b)VHa CDR2， 其包 含如SEQ ID NO:9‑18中任一项所示的氨基酸序列； (c)VHa CDR3， 其包 含如SEQ ID NO:19或20所示的氨基酸序列； (d)VLa CDR1， 其包含如SEQ ID NO:36‑40中任一项所示的氨基酸序列； (e)VLa CDR2， 其包 含如SEQ ID NO:41‑44中任一项所示的氨基酸序列； (f)VLa CDR3， 其包 含如SEQ ID NO:45‑48中任一项所示的氨基酸序列。 2.如权利要求1所述的抗体或抗原结合片段， 其特征在于， 所述可变区a包含所述VHa   CDR1、 VHa CDR2、 VHa CDR3、 VLa CDR1、 VLa CDR2和VLa  CDR3。 3.如权利要求1所述的抗体或抗原结合片段， 其特征在于， 所述VHa  CDR1包含如SEQ  ID  NO:4所示的氨基酸序列； 所述VHa  CDR2包含如SEQ  ID NO:9‑14中任一项所示的氨基酸序 列； 所述VHa  CDR3包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列； 或 所述VHa CDR1包含如SEQ  ID NO:4所示的氨基酸序列； 所述VHa  CDR2包含如SEQ  ID  NO:14所示的氨基酸序列； 所述VHa  CDR3包含如SEQ  ID NO:19所示的氨基酸序列； 所述VLa   CDR1包含如SEQ  ID NO:36所示的氨 基酸序列； 所述VLa  CDR2包含如SEQ  ID NO:41所示的氨 基酸序列； 所述VLa  CDR3包含如SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列。 4.如权利要求1 ‑3中任一项所述的抗体或抗原结合片段， 其特征在于， 所述抗体或抗原 结合片段还包含 特异性结合CD47的可变区b； 其中， 所述可变区b包含(g) ‑(l)中一种或多种 氨基酸序列： (g)VHb CDR1， 其包含如SEQ ID NO:21‑23中任一项所示的氨基酸序列； (h)VHb CDR2， 其包 含如SEQ ID NO:24‑28中任一项所示的氨基酸序列； (i)VHb CDR3， 其包 含如SEQ ID NO:29‑35中任一项所示的氨基酸序列； (j)VLb CDR1， 其包含如SEQ ID NO:36‑40中任一项所示的氨基酸序列； (k)VLb CDR2， 其包 含如SEQ ID NO:41‑44中任一项所示的氨基酸序列； (l)VLb CDR3， 其包 含如SEQ ID NO:45‑48中任一项所示的氨基酸序列。 5.如权利要求4所述的抗体或抗原结合片段， 其特征在于， 所述可变区b包含所述VHb   CDR1、 VHb CDR2、 VHb CDR3、 VLb CDR1、 VLb CDR2和VLb  CDR3。 6.如权利要求4所述的抗体或抗原结合片段， 其特征在于， 所述VHb  CDR1包含如SEQ  ID  NO:21所示的氨基酸序列； 所述VHb  CDR2包含如SEQ  ID NO:24所示的氨基酸序列； 所述VHb   CDR3包含如SEQ  ID NO:29所示的氨 基酸序列； 所述VLb  CDR1包含如SEQ  ID NO:36所示的氨 基酸序列； 所述VLb  CDR2包含如SEQ  ID NO:41所示的氨 基酸序列； 所述VLb  CDR3包含如SEQ   ID NO:45所示的氨基酸序列。 7.如权利 要求1‑6中任一项所述的抗体或抗原结合片段， 其特征在于， 所述VLa  CDR1与 所述VLb CDR1包含相同的氨基酸序列， 所述VLa  CDR2与所述VLb  CDR2包含相同的氨基酸序 列， 和/或所述VLa  CDR3与所述VLb  CDR3包含相同的氨基酸序列。 8.如权利要求1 ‑7中任一项所述的抗体或抗原结合片段， 其特征在于， 所述可变区a包 含重链可变区VHa和轻链可变区VLa； 其中， 所述VHa包含如SEQ  ID NO:49‑63中任一项所示的氨基酸序列， 或与SEQ  ID NO:49‑63权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 114437227 A 2中任一项所示的氨基酸序列至少有90％同源性的氨基酸序列； 和/或 所述VLa包含如SEQ  ID NO:75‑80中任一项所示的氨基酸序列， 或与SEQ  ID NO:75‑80 中任一项所示的氨基酸序列至少有90％同源性的氨基酸序列。 9.如权利要求1 ‑8中任一项所述的抗体或抗原结合片段， 其特 征在于， 所述VHa包含如SEQ  ID NO:54所示的氨基酸序列， 或与SEQ  ID NO:54所示的氨基酸序 列至少有90％同源性的氨基酸序列； 和/或 所述VLa包含如SEQ  ID NO:75所示的氨基酸序列， 或与SEQ  ID NO:75所示的氨基酸序 列至少有90％同源性的氨基酸序列。 10.如权利要求1 ‑9中任一项所述的抗体或抗原结合片段， 其特征在于， 所述可变区b包 含重链可变区VHb和轻链可变区VLb； 其中， 所述VHb包含如SEQ  ID NO:64‑74中任一项所示的氨基酸序列， 或与SEQ  ID NO:64‑74 中任一项所示的氨基酸序列至少有90％同源性的氨基酸序列； 和/或 所述VLb包含如SEQ  ID NO:75‑80中任一项所示的氨基酸序列， 或与SEQ  ID NO:75‑80 中任一项所示的氨基酸序列至少有90％同源性的氨基酸序列。 11.如权利要求1 ‑9中任一项所述的抗体或抗原结合片段， 其特征在于， 所述VHb包含如 SEQ ID NO:64所示的氨 基酸序列， 或与SEQ  ID NO:64所示的氨 基酸序列至少有90％同源性 的氨基酸序列； 和/或 所述VLb包含如SEQ  ID NO:75所示的氨基酸序列， 或与SEQ  ID NO:75所示的氨基酸序 列至少有90％同源性的氨基酸序列。 12.如权利要求1 ‑11任一项所述的抗体或抗原结合片段， 其特征在于， 所述VLa与所述 VLb包含相同的氨基酸序列。 13.如权利要求1 ‑12任一项所述的抗体或抗原结合片段， 其特征在于， 所述抗体或抗原 结合片段还包含重链恒定区a和重链恒定区b， 所述重链恒定区a和所述重链恒定区b分别与 重链可变区a和 重链可变区b连接， 所述重链恒定区a和/或所述重链恒定区b包含如下一种 或多种氨基酸 突变， 其中氨基酸 位置为Eu编号： Y349C、 S354C、 T366W、 T366S、 L368A以及Y407V； 可选的还 包含如下氨基酸 突变： N297A。 14.如权利要求13所述的抗体或抗原结合片段， 其特征在于， 所述重链恒定区a和重链 恒定区b之一包 含如下一种或多种氨基酸 突变： N297A、 S354C以及T3 66W； 和/或 另一个重链恒定区包 含如下一种或多种氨基酸 突变： N297A、 Y349C、 T366S、 L368A以及Y407V。 15.如权利要求13所述的抗体或抗原结合片段， 其特征在于， 所述其中一个重链恒定区 包含如SEQ  ID NO:81、 83或85所示的氨 基酸序列， 或与 SEQ ID NO:81、 83或85所示的氨基酸 序列至少有90％同源性的氨基酸序列； 和/或另一个重链恒定区包含如SEQ  ID NO:81、 84 或 86所示的氨基酸序列， 或与SEQ  ID NO:81、 84或86所示的氨基酸序列至少有90％同源性的 氨基酸序列。 16.一种双特异抗体或抗原结合片段， 其特征在于， 所述抗体或抗原结合片段包含一条 重链a、 一条重链b以及两条相同的轻链； 所述重链a和一条所述轻链配对形成PD ‑