(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111354467.2 (22)申请日 2021.11.16 (66)本国优先权数据 202110440561.3 2021.04.23 CN (71)申请人 南京北恒生物科技有限公司 地址 210061 江苏省南京市江北新区探 秘 路73号树屋十六栋B1-2 (72)发明人 邢芸　李国坤　任江涛　贺小宏　 王延宾　韩露　 (74)专利代理 机构 苏州创元专利商标事务所有 限公司 3210 3 专利代理师 范晴 (51)Int.Cl. C12N 5/10(2006.01) C12N 15/62(2006.01) C12N 15/867(2006.01) A61K 39/00(2006.01)A61K 48/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 31/00(2006.01) A61P 37/02(2006.01) A61P 35/02(2006.01) A61P 31/12(2006.01) A61P 31/04(2006.01) A61P 33/00(2006.01) A61P 3/10(2006.01) A61P 29/00(2006.01) A61P 1/00(2006.01) A61P 25/00(2006.01) A61P 17/06(2006.01) A61P 19/02(2006.01) A61P 21/04(2006.01) A61P 9/14(2006.01) A61P 7/06(2006.01) (54)发明名称 工程化免疫细胞及其用途 (57)摘要 本发明涉及一种工程化免疫细胞， 其表达 (i)特异性识别配体的细胞表面分子， (ii)一种 或多种外源性的细胞因子， 选自IL12、 IL18、 IL ‑ 21、 IL23和IL33， 和(iii)一种或多种外源 性的趋 化因子， 所述趋化因子选自XCL2和XCL1。 本发明 还提供了 该工程化免疫细胞在 治疗癌症、 感染或 自身免疫性疾病中的用途。 与传统的工程化免疫 细胞细胞相比， 本发明的工程化免疫细胞具有显 著提高的肿瘤杀伤活性。 权利要求书3页 说明书19页 序列表32页 附图5页 CN 115232797 A 2022.10.25 CN 115232797 A 1.一种工程化免疫细胞， 其表达(i)特异性识别配体的细胞表面分子， (ii)一种或多种 外源性的细胞因子， 其选自IL12、 IL18、 IL ‑21、 IL23和IL33， 和(iii)一种或多种外源性的趋 化因子， 其选自XCL2和XCL1。 2.权利要求1所述的工程化免疫细胞， 其中所述特异性识别配体的细胞表面分子是嵌 合抗原受体、 T细胞融合蛋白、 T细胞抗原耦合器或T细胞受体。 3.权利要求2所述的工程化免疫细胞， 其中所述特异性识别配体的细胞表面分子是包 含以下的嵌合抗原受体： 配体结合结构域、 跨膜结构域和胞内结构域， 所述胞内结构域包含 共刺激结构域和/或初级信号传导结构域。 4.权利要求1 ‑3任一项所述的工程化免疫细胞， 其中所述细胞因子是野生型或其变体， 所述变体具有与野生型相同或相似的功能。 5.权利要求4所述 的工程化免疫细胞， 其中所述IL ‑21与SEQ ID NO： 32、 34或36所示 的 氨基酸序列具有至少90％同一性； IL12与SEQ  ID NO： 40或42所示的氨基酸序列具有至少 90％同一性， IL18与SEQ  ID NO： 44或46所示的氨基酸序列具有至少90％同一性， IL23与SEQ   ID NO： 48或50所示的氨基酸序列具有至少90％同一性， IL33与SEQ  ID NO： 52、 54、 55、 56或 57所示的氨基酸序列具有至少90％同一 性。 6.权利要求1 ‑5任一项所述的工程 化免疫细胞， 其中所述XCL1基因与SEQ  ID NO： 23或25所示的核酸序列具有至少90％同一性， 或者所述XCL1基因编码的多肽与SEQ   ID NO： 24或26所示的氨基酸序列具有至少90％同一性， 其中所述XCL2基因与SEQ  ID NO： 37 所示的核酸序列具有至少90％同一性， 或者所述XCL2 基因编码的多肽与SEQ  ID NO： 38所示 的氨基酸序列具有至少90％同一 性。 7.权利要求1 ‑5任一项所述的工程化免疫细胞， 其中所述免疫细胞选自T细胞、 巨噬细 胞、 树突状细胞、 单核细胞、 NK细胞、 或NKT细胞。 8.权利要求7所述的工程化免疫细 胞， 其中所述T细 胞是CD4+/CD8+T细胞、 CD4+辅助T细 胞、 CD8+T细胞、 CD4 ‑CD8‑T细胞、 肿瘤浸润细胞、 记忆T细胞、 幼 稚T细胞、 调节性T细胞、 γδ ‑T 细胞或α β ‑T细胞。 9.权利要求3 ‑8任一项所述的工程化免疫细胞， 其中所述配体结合结构域选自IgG、 Fab、 Fab'、 F(ab')2、 Fd、 Fd ′、 Fv、 scFv、 sdFv、 线性抗体、 单结构域抗体、 纳米抗体、 双体、 anticalin和DARPI N。 10.权利要求3所述的工程化免疫细胞， 其中所述配体结合结构域与选自以下的靶标结 合： CD2、 CD3、 CD4、 CD5、 CD7、 CD8、 CD14、 CD15、 CD19、 CD20、 CD21、 CD22、 CD23、 CD24、 CD25、 CD30、 CD33、 CD37、 CD38、 CD40、 CD40L、 CD44、 CD46、 CD47、 CD52、 CD54、 CD56、 CD 70、 CD73、 CD80、 CD97、 CD123、 CD126、 CD138、 CD171、 CD  179a、 DR4、 DR5、 TAC、 TEM1/CD248、 VEGF、 GUCY2C、 EGP40、 EGP ‑ 2、 EGP‑4、 CD133、 IFNAR1、 DLL3、 kappa轻链、 TIM3、 TSHR、 CD19、 BAFF ‑R、 CLL‑1、 EGFRvIII、 tEGFR、 GD2、 GD3、 BCMA、 Tn抗原、 PSMA、 ROR1、 FLT3、 FAP、 TAG72、 CD44v6、 CEA、 EPCAM、 B7H3、 KIT、 IL‑13Ra2、 IL ‑llRa、 IL‑22Ra、 IL‑2、 间皮素、 PSCA、 PRSS21、 VEGFR2、 LewisY、 PDGFR ‑β 、 SSEA‑ 4、 AFP、 Folate受体α、 ErbB2(Her2/neu)、 ErbB3、 ErbB4、 MUC1、 MUC16、 EGFR、 CS1、 NCAM、 Claudin18.2、 c ‑Met、 Prostase、 PAP、 ELF2M、 Ephrin  B2、 IGF‑I受体、 CAIX、 LMP2、 gpl00、 bcr ‑ abl、 酪氨酸酶、 EphA2、 Fucosyl  GMl、 sLe、 GM3、 TGS5、 HMWMAA、 o ‑乙酰基‑GD2、 Folate受体β 、 TEM7R、 CLDN6、 GPRC5D、 CXORF61、 ALK、 多 聚唾液酸、 PLAC1、 GloboH、 NY ‑BR‑1、 UPK2、 HAVCR1、权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 115232797 A 2ADRB3、 PANX3、 GPR20、 LY6K、 OR51E2、 TARP、 WT1、 NY ‑ESO‑1、 LAGE‑la、 MAGE‑A1、 MAGE‑A3、 MAGE‑ A6、 豆荚蛋白、 HPV  E6、 E7、 ETV6 ‑AML、 精子蛋白17、 XAGE1、 Tie2、 MAD ‑CT‑1、 MAD‑CT‑2、 Fos相 关抗原1、 p53、 p53突变体、 PSA、 存活蛋白和端粒 酶、 PCTA‑l/Galectin  8、 MelanA/MARTl、 Ras 突变体、 hTERT、 肉瘤易位断点、 ML ‑IAP、 TMPRSS2  ETS融合基因、 NA17、 PAX3、 雄激素受体、 孕 酮受体、 Cyclin  Bl、 MYCN、 RhoC、 T RP‑2、 CYP1B 1、 BORIS、 SART3、 PAX5、 OY ‑TES 1、 LCK、 AKAP ‑ 4、 SSX2、 RAGE ‑1、 人端粒酶逆转录酶、 RU1、 RU2、 肠道羧酸酯酶、 mut  hsp70‑2、 CD79a、 CD79b、 CD72、 LAIR1、 FCAR、 LILRA2、 CD300LF、 CLEC12A、 BST2、 EMR2、 LY75、 GPC3、 FCRL5、 IGLL1、 PD1、 PDL1、 PDL2、 TGFβ、 APRIL、 NKG2D、 NKG2D配体， 和/或病原体特异性抗原、 生物素化分子、 由 HIV、 HCV、 HBV和/或其 他病原体表达的分子； 和/或 新表位或新 抗原。 11.权利要求3 ‑10任一项所述的工程化免疫细胞， 其中所述跨膜结构域选自以下蛋白 质的跨膜结构域： TCRα 链、 TCRβ 链、 TCRγ链、 TCRδ链、 CD3ζ亚基、 CD3ε亚基、 CD3γ亚基、 CD3δ 亚基、 CD45、 CD4、 CD5、 CD8α、 CD9、 CD16、 CD22、 CD33、 CD28、 CD37、 CD64、 CD8