(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111340715.8 (22)申请日 2021.11.12 (66)本国优先权数据 202011260418.8 2020.1 1.12 CN 202011269292.0 2020.1 1.13 CN (71)申请人 迈威 （上海） 生物科技股份有限公司 地址 201210 上海市浦东 新区李冰路576号 （创想园） 3号楼4楼 (72)发明人 王荣娟　王双　张畅　焦莎莎　 曾大地　张姣　 (51)Int.Cl. C07K 16/28(2006.01) C07K 16/46(2006.01) C12N 15/13(2006.01) C12N 15/62(2006.01)A61K 39/395(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 抗体及其制备方法 (57)摘要 本发明公开了抗体及其制备方法， 抗体诸如 人源化抗人CD47单克隆抗体或其片段和靶向PD ‑ L1和CD47的双特异性抗体或其抗原结合片段， 其 中， 双特异性抗体包括两条重链和两条轻链， 其 中所述两 条重链的可变区是异源的， 所述两条轻 链可变区序列相似。 本公开提供的双特异性抗 体， 具有相似序列的轻链， 因而克服了双特异性 抗体装配过程中轻重链错配的技 术问题。 权利要求书2页 说明书25页 序列表39页 附图8页 CN 114478770 A 2022.05.13 CN 114478770 A 1.一种人源化 抗人CD47 单克隆抗体或其片段， 其特 征在于， 包括： 重链CDR1， 包括X1YX2MX3， 其中X1选自N、 S， X2选自V、 A， X3选自H、 S； 重链CDR2， 包括YINPX4NX5X6IKYNEKFX7G， 其中X4选自Y、 G， X5选自D、 E， X6选自G、 A， X7选自 T、 Q； 重链CDR3， 包括EGDFYANYGRLGF X8Y， 其中X8选自A、 D； 并且， 轻链CDR1， 包括RASQDIX9NYLN， 其中X9选自S、 T； 轻链CDR2， 包括YTSRLX10S， 其中X10 选自H、 Q、 S； 轻链CDR3， 包括QQGX11X12X13PX14T， 其中X11选自D、 A， X12选自T、 G， X13选自F、 R、 Y、 K、 S、 E、 N， X14选自Y、 R。 2.如权利要求1所述的人源化抗人CD47单克隆抗体或其片段， 其特征在于， 所述人源化 抗人CD47 单抗或其片段的CDRs区和/或FR区包括 点突变。 3.如权利要求1所述的人源化抗人CD47单克隆抗体或其片段， 其特征在于， 所述重链 CDR1具有SEQ  ID NO:76、 77、 78或87 所示的序列； 所述重链CDR2具有SEQ  ID NO:79、 80、 81、 82、 83或84所示的序列； 所述重链CDR3具有SEQ  ID NO:85或86所示的序列， 任选地， 所述轻链CDR 1具有SEQ  ID NO:46或47 所示的序列； 所述轻链CDR2具有SEQ  ID NO:50、 51或52所示的序列； 所述轻链CDR3具有SEQ  ID NO:56、 57、 58、 59、 6 0、 61、 62、 6 3、 64、 65或68所示的序列。 4.如权利 要求1‑3中任一所述人源化抗人CD47单克隆抗体或其片段， 其特征在于， 所述 的人源化抗人CD47单抗或其片段具有SEQ  ID NO:8、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 2 0、 21、 22或23所示重链可变区， SEQ  ID NO:5所示轻链可变区。 5.一种多特异性抗体， 其特征在于， 所述多特异性抗体至少包括一个针对人CD47的特 异性的结合位点， 所述针对人CD47的特异性结合位点是由权利要求1 ‑4中任一项所述人源 化抗人CD47 单抗或其片段提供的。 6.如权利要求5所述多特异性抗体， 其特征在于： 所述多特异性抗体包括针对人CD47不 同表位的多个特异性结合 位点， 任选地， 所述多特异性 抗体还包括针对非人CD47靶向的特异性结合 位点， 任选地， 所述多特异性 抗体为双特异性 抗体、 三特异性 抗体或四特异性 抗体。 7.一种靶向PD ‑L1和CD47的双特异性抗体或其抗原结合片段， 其特征在于， 包括两条重 链和两条轻链， 其中， 第一重链可变区源自抗CD47单克隆抗体的重链可变区、 其能够与轻链 可变区形成CD47结合位点， 第二重链可变区源自抗PD ‑L1单克隆抗体的重链可变区、 其能够 与轻链可变区形成P D‑L1结合位点； 其中， 所述两条轻链的轻链可变区的序列相同， 并且， 所述轻链可变区是基于抗CD47单 克隆抗体的轻链和抗PD ‑L1单克隆抗体的轻链得到的， 且所述轻链可变区与所述第一重链 可变区形成的第一可变区结合位点与CD47特意性结合， 且 所述轻链可变区与所述第二重链 可变区相匹配形成的第二可变区结合 位点与PD‑L1特意性结合， 其中， 所述抗CD47单克隆抗体为权利要求1 ‑4任一所述的人源化抗人CD47单抗或其片 段。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114478770 A 28.如权利要求7所述靶向PD ‑L1和CD47的双特异性抗体或其抗原结合片段， 其特征在 于， 所述抗PD ‑L1单克隆抗体包括SEQ  ID NO:3所示重链可变区和SEQ  ID NO:1所示轻链可 变区。 9.如权利要求7所述靶向PD ‑L1和CD47的双特异性抗体或其抗原结合片段， 其特征在 于， 所述第二重链可变区具有SEQ  ID NO:46所示的CDR1和SEQ  ID NO:61、 62、 63、 70、 71或72 所示的CDR3， 任选地， 所述轻链可变区具有SEQ  ID NO:1、 24、 25、 26、 27、 28、 29、 30、 31、 32,、 33或34所 示的序列。 10.如权利要求7述的双特异性抗体或其抗原结合片段， 其特征在于， 所述第一重链的 Fc段包含H315R突变、 所述第二重链的Fc段包括K319E突变， 所述Fc段氨基酸突变位点使用 Kabat的Eu编号系统。 11.一种多核苷酸， 其特征在于， 编码权利要求1 ‑4任一所述的人源化抗人CD47单抗或 其片段， 或权利要求5 ‑6任一项所述的多特异性抗体， 或权利要求7 ‑10任一项所述的靶向 PD‑L1和CD47的双特异性 抗体或其 抗原结合片段。 12.载体， 其特 征在于， 包括权利要求1 1所述的多 核苷酸。 13.宿主细胞， 其特征在于， 包括权利要求11所述的多核苷酸或权利要求12所述的载 体。 14.一种制备抗体或其 抗原结合片段的方法， 其包括以下步骤： (1)在适合表达双特异性抗体或其抗原结合片段的条件下培养权利要求13所述宿主细 胞； (2)从细胞培 养物中分离纯化双特异性 抗体或其片段。 15.一种组合物， 其包含权利要求1 ‑4任一所述的人源化抗人CD47单抗或其片段， 或权 利要求5‑6任一项所述的多特异性抗体， 或权利要求7 ‑10任一项所述的靶向PD ‑L1和CD47的 双特异性抗体或其抗原结合片段、 权利要求11所述多核苷酸、 权利要求12所述载体和权利 要求13所述宿主细胞中的至少一种。 16.权利要求1 ‑4任一所述的人源化抗人CD47单抗或其片段， 或权利要求5 ‑6任一项所 述的多特异性抗体， 或权利要求7 ‑10任一项所述的靶向PD ‑L1和CD47的双特异性抗体或其 抗原结合片段、 权利要求11所述多核苷酸和权利要求15所述组合物在制备治疗肿瘤和/或 提高机体免疫应答药物中的用途。 17.如权利要求16所述的用途， 其特征在于， 所述肿瘤包括黑色素瘤、 肺癌、 肾癌、 霍奇 金淋巴瘤、 头颈鳞癌、 尿 路上皮癌、 急慢性髓系白血病、 急性淋巴细胞白血病、 非霍奇金淋巴 瘤、 膀胱癌、 卵巢癌、 乳腺癌、 直肠癌、 前列腺癌、 肾癌和多发性骨髓瘤。 18.治疗患有肿瘤的对象的方法， 所述方法包括向所述对象施用治疗有 效量的组合物， 所述组合物为权利要求要求15所述的组合物。 19.如权利要求18所述的方法， 其特征在于， 所述肿瘤包括黑色素瘤、 肺癌、 肾癌、 霍奇 金淋巴瘤、 头颈鳞癌、 尿 路上皮癌、 急慢性髓系白血病、 急性淋巴细胞白血病、 非霍奇金淋巴 瘤、 膀胱癌、 卵巢癌、 乳腺癌、 直肠癌、 前列腺癌、 肾癌和多发性骨髓瘤。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114478770 A 3