(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111301882.1 (22)申请日 2021.11.04 (71)申请人 武汉科技大 学 地址 430081 湖北省武汉市青山区和平大 道947号 (72)发明人 周翔　代雨婷　蔡苗苗　黄文武　 张同存　蒋争凡　 (74)专利代理 机构 武汉智嘉联合知识产权代理 事务所(普通 合伙) 42231 代理人 张璐 (51)Int.Cl. A61K 31/47(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 35/02(2006.01) C12N 15/867(2006.01)C12N 5/10(2006.01) (54)发明名称 氯喹那多在制备抗肿瘤药物中的应用 (57)摘要 本发明公开了氯喹那多在制备抗肿瘤药物 中的应用。 本发明通过研究首次发现， 抗菌素氯 喹那多可作为免疫激活剂， 显著提高CD19  CAR‑T 在体外对表达CD19抗原靶细胞的杀伤效率， 还能 抑制负荷CD19+肿瘤小鼠体内肿瘤的扩增， 即增 强CD19 CAR‑T对肿瘤细胞的杀伤作用， 将其与 CAR‑T联用有望产生更优的肿瘤治疗效果， 并且 对细胞无毒副作用， 作为小分子其能够迅速穿过 细胞表面进入细胞， 使用起来简便易行， 直接共 孵育即可诱导细胞产生协同抗肿瘤反应， 避免了 其他类型药物活性有限、 半衰期短、 需要血液注 射给药等局限性； 可以适用于多种不同种类的培 养细胞和小鼠动物模型， 应用范围广泛， 有望在 临床抗肿瘤试验中获得使用和推广。 权利要求书1页 说明书9页 附图3页 CN 114081883 A 2022.02.25 CN 114081883 A 1.氯喹那多在制备抗肿瘤药物中的应用。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特 征在于， 所述氯喹那多的结构式为： 3.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述氯喹那 多通过增强CD19  CAR‑T细胞对 肿瘤细胞的杀伤效果， 达 到抗肿瘤的作用。 4.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于， 当所述氯喹那多 的浓度为10～50μM时， 具 有体外杀伤肿瘤 细胞的作用。 5.根据权利要求4所述的应用， 其特征在于， 所述肿瘤细胞为表达CD19表面抗原的肿瘤 细胞。 6.根据权利要求5所述的应用， 其特征在于， 所述肿瘤细胞包括： 人Burkitt ’s淋巴瘤细 胞Raji和/或人急性淋巴细胞白血病细胞Nalm6 。 7.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于， 当所述氯喹那多 的用量≥5mg/Kg时， 具有 体内抗肿瘤作用。 8.根据权利要求7所述的应用， 其特征在于， 将所述氯喹那多进行腹腔注射， 并将CD19   CAR‑T细胞进行静脉注射， 达 到体内协同抗肿瘤作用。 9.根据权利要求3所述的应用， 其特 征在于， 所述CD19  CAR‑T细胞的制备 方法包括： 步骤一、 培 养293T细胞， 以制备CAR慢病毒； 步骤二、 收集静脉 血， 去除血浆后， 分离得到PBM C； 步骤三、 将上述得到的PBMC进行磁珠分选， 得到T淋巴细 胞， 并对T淋巴细胞进行激活和 培养； 步骤四、 将步骤一制备得到的CAR慢病毒用于感染T淋 巴细胞， 并进行检测， 得到所述 CD19 CAR‑T细胞。 10.氯喹那多在制备小分子免疫激活剂中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114081883 A 2氯喹那多在制备抗肿瘤药物中的应用 技术领域 [0001]本发明属于免疫细胞治疗技术领域， 具体涉及氯喹那多在制备抗肿瘤药物中的应 用。 背景技术 [0002]急性B淋巴细胞白血病(B ‑cell acute lymphoblastic  leukemia,B ‑ALL)是最为 常见的一种造血系统的恶性肿瘤， 据统计， 成年患者长期的无病生存率(disease ‑free  survival,DFS)明显低下， 并且一旦复发， 常规化疗的缓解率低且预后极差。 B细胞淋巴瘤、 急性淋巴白血病与慢性淋巴白血病都起源于淋巴B细胞。 在B淋巴细胞白血病发病期间， 白 血病干细胞通过弱化免疫原 性肿瘤细胞的生长以及利用对主动免疫应答的抑制， 从而 逃逸 免疫系统监测。 近些年出现了非常多的新型药物和新型疗法， 但仍未出现能彻底根治清除 白血病干细胞的治疗方法。 临床对B淋巴细胞白血病的治疗主要以放疗与化疗为主要方式， 但患者的复发与疾病的难治性一直是导致治疗最终失败的原因。 免疫疗法的发展为根治B 淋巴细胞白血病提供了新的希望， 其中CAR ‑T细胞疗法在体外试验获得了很好的反应， 并且 1期临床也取得了较好的效果。 CAR ‑T(chimeric  antigen receptor  T cells,嵌合抗原受 体)细胞对 人类表达CD19的B细胞恶性肿瘤具有显著的活性， 这些 受体融合了肿瘤特异性抗 体的单链可变片段(ScFv)与效应T细胞的信号分子， 共同靶向肿瘤细胞。 作为肿瘤相关抗原 之一， CD19抗原 一般在正常B细胞和肿瘤B细胞上表达， 在其他组织和血液细胞没有表达， 因 此被认为是CAR ‑T治疗B淋巴细胞白血病的理想靶点。 [0003]然而， CAR ‑T细胞治疗的效果受机体免疫状态影响， 导致部分患者无法从CAR ‑T疗 法中受益。 且CAR ‑T细胞注射进体内以后， 杀伤效率会随时间增 长而降低， 可能是因为肿瘤 免疫调节细胞Treg限制了CAR ‑T的杀伤作用。 如 何消除免疫抑制、 激活机体的免疫系统， 是 提高CAR‑T治疗效果的关键所在。 [0004]近年来天然免疫激活剂应用于CAR ‑T细胞对肿瘤细胞靶向性与杀伤性的研究发 现， 激活剂通过激活STING通路可以提高CAR ‑T细胞对免疫的应答以及抵达肿瘤微环 境的运 输效率。 天然免疫c GAS‑STING通路已经被证明可以激活一型干扰素通路并以此调节下游免 疫通路， 一型干扰素可以使巨噬细胞向杀伤性M1型转化， 协同增强杀瘤效果。 然而 该类激活 剂存在对CD19  CAR‑T的作用不够明显， 对肿瘤杀伤效果相对较差的缺陷， 基于此开发具有 显著增强CD19CAR ‑T对肿瘤的杀伤抑制效果的小分子免疫激活剂， 对于恶性肿 瘤的治疗具 有重要意 义。 发明内容 [0005]本发明的目的在于提供了氯喹那多在制备抗肿瘤药物中的应用， 本发明通过研究 发现， 抗菌素氯喹那多除了对治疗恶性疟原虫感染具有一定的效果外， 还可作为一种新型 天然免疫激活剂， 显著提高CD19  CAR‑T在体外对表达CD19抗原的靶细胞的杀伤效率， 还能 抑制负荷CD19+肿瘤的小鼠体内肿瘤的扩增， 即增强CD19  CAR‑T对肿瘤细胞和肿瘤组织的说　明　书 1/9 页 3 CN 114081883 A 3