(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111414759.0 (22)申请日 2021.11.25 (71)申请人 广州百暨基因科技有限公司 地址 510700 广东省广州市黄埔区经济技 术开发区科 学城开源大道 206号第3层 (72)发明人 李光超　罗敏　丁雯　王学俊　 (74)专利代理 机构 华进联合专利商标代理有限 公司 44224 代理人 董洪荣 (51)Int.Cl. C07K 19/00(2006.01) C12N 15/62(2006.01) C12N 5/10(2006.01) A61K 39/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 融合蛋白及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种融合蛋白， 包括自N端至C 端顺次连接的靶向CD19的嵌合抗原受体、 连接子 元件和CXCR5蛋白； 所述嵌合抗原受体包括自N端 至C端顺次连接的CD19抗体、 跨膜结构域、 共刺激 结构域和胞内信号传导结构域。 本发 明还公开了 一种分离的核酸， 其表达得到所述的融合蛋白。 本发明还公开了一种含有所述核酸的载体。 本发 明还公开了一种T细胞。 本发明还公开了包含所 述的T细胞。 本发明还公开了 所述的T细胞在制备 用于治疗B细胞淋巴瘤的药物中的应用。 权利要求书2页 说明书9页 序列表5页 附图8页 CN 114230673 A 2022.03.25 CN 114230673 A 1.一种融合 蛋白， 其特征在于， 包括自N端至C端顺次连接的靶向CD19的嵌合抗原受体、 连接子元件和CXCR5蛋白； 所述嵌合抗原受体包括自N端至C端顺次连接的CD19抗体、 跨膜结构域、 共刺激结构域 和胞内信号传导结构域。 2.根据权利要求1所述的融合 蛋白， 其特征在于， 所述CD19抗体的氨基酸序列 为SEQ ID  NO： 2所示。 3.根据权利要求2所述的融合蛋白， 其特征在于， 所述CXCR5蛋白的氨基酸序列为SEQ   ID NO： 8所示。 4.根据权利要求3所述的融合蛋白， 其特征在于， 所述连接子元件选自T2A、 P2A、 E2A、 F2A和IRES中的一种， 或T2A、 P2A、 E2A、 F2A与IRES至少两者的任何组合中的任一种； 优选 T2A， 且氨基酸序列为SEQ  ID NO： 7所示。 5.根据权利要求4所述的融合蛋白， 其特征在于， 所述跨膜结构域包含源自下组中的一 种或多种蛋白的跨膜域:CD8、 CD28、 4 ‑1BB、 CD4、 CD27、 CD7、 PD ‑l、 TRAC、 TRBC、 CD3ε、 CD3ζ、 CTLA‑4、 LAG‑3、 CD5、 ICOS、 OX40、 NKG2D、 2B4、 CD244、 Fc εRIγ、 BTLA、 CD30、 GITR、 HVEM、 DAPI0、 CD2、 NKG2C、 LIGHT、 DAPI2、 CD40L、 TIMl、 CD226、 DR3、 CD45、 CD80、 CD86、 CD9、 CD16、 CD22、 CD33、 CD37、 CD64、 CD134、 CD137、 CD154和SLAM； 优选源自CD 8蛋白的跨膜域， 且氨基酸序列为SEQ  ID NO： 4所示。 6.根据权利要求4所述的融合蛋白， 其特征在于， 所述共刺激结构域包含源自下组中的 一种或多种蛋白的共刺激 结构域:CD28、 4 ‑1BB、 CD27、 CD2、 CD7、 CD8、 OX40、 CD22 6、 DR3、 SLA M、 CDS、 ICAM ‑1、 NKG2D、 NKG2C、 B7 ‑H3、 2B4、 Fc  r RIγ、 BTLA、 GITR、 HVEM、 DAP10、 DAP12、 CD30、 CD40、 CD40L、 TIM1、 PD ‑1、 LFA‑1、 LIGHT、 JAML、 CD244、 CD100、 ICOS、 CD83的配体、 CD40和 MyD88； 优选4‑1BB， 且氨基酸序列为SEQ  ID NO： 5所示。 7.根据权利要求1～6任一项所述的融合蛋白， 其特征在于， 所述胞内信号传导结构域 包含源自下组中的一种或多种蛋白的胞内信号传导结构域:CD3ζ、 CD3γ、 CD3E、 CD79a、 CD79b、 FcεRIγ、 FcεRIβ和FcγRIIa； 优选源自CD3ζ 蛋白的胞内信号传导结构域， 且氨基酸 序列为SEQ  ID NO： 6所示。 8.根据权利要求1～6任一项所述的融合蛋白， 其特征在于， 还包括连接于所述CD19抗 体和所述跨膜结构域之间的铰链区； 优选的， 所述铰链区的氨基酸序列为SEQ  ID NO： 3所 示。 9.根据权利 要求1～6任一项所述的融合 蛋白， 其特征在于， 所述CD19抗体的N端还设置 有信号肽； 优选的， 所述信号肽的氨基酸序列为SEQ  ID NO： 1所示。 10.分离的核酸， 其表达得到 权利要求1～ 9任一项所述的融合蛋白。 11.含有权利要求10所述核酸的载体。 12.细胞， 其特征在于， 含有权利要求10所述的核酸或权利要求11所述的载体， 或细胞 膜表面表达有权利要求 1～9任一项 所述的融合蛋白中的所述 嵌合抗原受体和所述CXCR5蛋 白。 13.根据权利要求12所述的细胞， 其特征在于， 所述细胞为免疫细胞； 优选的， 所述免疫 细胞选自辅助T细胞、 细胞毒性T细胞、 记忆T细胞、 调节性T细胞、 MAIT细胞、 γδT细胞、 NK细权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114230673 A 2胞和CIK细胞中的任一种。 14.药用组合物， 其特 征在于， 包 含权利要求12或13所述的细胞。 15.权利要求12或13所述的细胞在制备用于治疗B 细胞淋巴瘤的药物中的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114230673 A 3