ICS 65.020.20 B 31 DB36 江 西 省 地 方 标 准 DB36/T 1000—2017 芦笋亲本繁殖与杂交制种技术规程 Asparagus hybrid parents reproduction and hybrid seed production technology 2017 - 12 - 29 发布 江西省质量技术监督局 2018 - 03 - 01 实施 发 布 DB36/T 1000—2017 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 术语和定义 ........................................................................ 1 4 亲本组培快繁 ...................................................................... 1 5 杂交制种 .......................................................................... 3 6 果实收获 .......................................................................... 3 7 种子脱取与处理 .................................................................... 3 附录 A（规范性附录） 培养基配方 ...................................................... 4 I DB36/T 1000—2017 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。 本标准由江西省农业厅提出并归口。 本标准起草单位：江西省农业科学院蔬菜花卉研究所、江西省标准化研究院。 本标准主要起草人：罗绍春、周劲松、汤泳萍、张岳平、尹玉玲、谢启鑫、陈光宇。 II DB36/T 1000—2017 芦笋亲本繁殖与杂交制种技术规程 1 范围 本标准规定了芦笋亲本繁殖与杂交制种技术的术语和定义、亲本组培快繁、杂交制种、果实收获、 种子脱取与处理等芦笋杂交品种亲本繁殖与杂交制种技术过程。 本标准适用于芦笋杂交品种亲本繁殖与杂交种子生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 3543.1 农作物种子检验规程 总则 NY/T 760 芦笋 NY/T 2496 植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南 芦笋 NY/T 5231 无公害食品 芦笋生产技术规程 TG/130/4 国际植物新品种保护联盟（UPOV）指南 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 幼株期 芦笋定植后至可开始采笋的生长时期。 3.2 外植体 用于植物组织培养的组织或器官。 3.3 培养周期 植物组织培养过程中外植体培养的继代间隔时间。 4 亲本组培快繁 4.1 外植体取材与表面消毒 春季4月～5月份，分别选择父本与母本生长健壮的植株（亲本选择应符合NY/T 760 、NY/T 2496 和TG/130/4要求），采取新抽生出的长约25cm的健壮嫩茎为外植体。将它置于自来水下轻轻冲洗5min～ 1 DB36/T 1000—2017 10min，剪去顶端鳞片包被和底端纤维化程度高的部分。在超净工作台上先用75%的酒精浸泡30s，再用 2%的次氯酸钠灭菌8min～10min，无菌水清洗3次～5次，无菌滤纸吸干待用。 4.2 无菌培养 4.2.1 培养条件 以下培养条件均为温度27±1℃，相对湿度70%～80%，光照时间12h/d，光照强度2500Lux。 4.2.2 腋芽诱导培养 在超净工作台上，将消毒完毕的嫩茎切成每个带有1个～2个腋芽的茎段，切去外植体变色部分，生 长极性朝上，接种至腋芽诱导培养基，置于无菌培养室中培养1个周期（20d～30d，下同），每个茎段 叶腋处长出2个～3个嫩茎。 4.2.3 根丛诱导培养 将每个茎段腋芽处诱导长出的超过5cm的嫩茎剪下，切去茎尖，平铺接种于根丛诱导培养基上，置 于无菌培养室中培养1个周期。每个叶腋处长出1个～3个嫩茎，切除嫩茎茎尖，重新平铺接种于根丛增 殖培养基上，继代培养1个～2个周期，直至每个叶腋处长出3个～8个成簇的根丛。 4.2.4 根丛增殖培养 以根丛为单位，将母体茎段切成株高2cm～3cm的根丛，然后接种到根丛增殖培养基上，置于无菌培 养室中培养1个周期。取出根丛，分割成2个～4个小根丛，接种于更新的根丛增殖培养基上，继代培养1 个～2个周期。 4.2.5 生根预分化培养 将增殖获得的根丛，修剪至株高2cm～3cm，接种至生根预分化培养基中，置于无菌培养室中继代培 养1个～2个周期，部分根丛基部分化诱导长出1条～2条肉质根。 4.2.6 生根培养 将生根预分化培养的根丛取出，分割成每个带3个～5个茎的小根丛，株高2cm～3cm，接种入生根培 养基中，置于无菌培养室中继代培养1个～2个周期，80%以上根丛基部长出3条～5条粗壮的肉质根，达 到移栽标准。 4.3 组培苗移栽与管理 4.3.1 移栽基质 用富含腐殖质的菜园土6份，泥炭、蛭石、珍珠岩、沙各1份配制移栽基质，或用蔬菜育苗专用基质。 4.3.2 移栽时间和方法 选择温湿度适宜的春秋季，移栽前开瓶炼苗7d～14d，以提高组培苗的移栽成活率。移栽前小心洗 净根系上附着的培养基，然后栽入装有基质的营养钵中，并浇透水。 4.3.3 日常管理 2 DB36/T 1000—2017 每天用微喷壶向叶面喷水保湿。芦笋试管苗生长温度在15℃～28℃为宜，高温时遮阳网遮荫，低温 时覆盖小拱棚提温保护。成活后适时喷施½MS营养液，促进壮苗。日常管理应符合NY/T 5231技术规范要 求。 5 杂交制种 5.1 选地 选择地势平坦，土壤肥沃、质地沙壤、排灌便利、通风透光的地块，切忌重茬种植。 5.2 隔离 与相邻芦笋田距离不得小于1000m，并用40目防虫网隔离。 5.3 亲本定植 杂交种生产采取塑料钢架连栋大棚设施栽培，父母本按2:8比例梅花桩式定植，株距50cm，行距 1.8m，单行种植。 5.4 去杂去劣 在定植前、幼株期、成株期和开花期鉴定父母本，将杂、病和劣株全部拨除，及时补足亲本。 5.5 幼株期管理 定植后幼株期不采笋，养苗促生，母本所结少量的果实及时摘除。 5.6 制种 5.6.1 错时留母茎 成株期错时留母茎制种。4月上旬，母本每株先留取3枝～4枝健壮母茎；父本则分两期留母茎，第 一期与母本同步留母茎，5d～7d后每株再留3枝～4枝健壮母茎，适时摘顶调节花期，以保证父母本花 期相遇。 5.6.2 授粉 4月下旬至5月中上旬进入花期，揭开两侧和棚头薄膜，保留隔离纱网，每4连栋大棚放入1箱中华 蜂进行虫媒授粉。 6 果实收获 8月下旬至9月上旬，待果实熟至深红色，适时采摘，分级收获。 7 种子脱取与处理 摘下果实及时取种子，晒干、过筛分级，包装。种子分级、包装应符合GB/T 3543.1技术规范。 3 DB36/T 1000—2017 附 录 A （规范性附录） 培养基配方 A.1 腋芽诱导培养基 -1 -1 -1 MS + 0.2g·L L-谷氨酰胺 + 0.1mg·L KT + 0.1mg·L NAA + 3%蔗糖 + 0.8%琼脂，pH5.8。 A.2 根丛诱导培养基 -1 -1 MS + 0.2g·L L-谷氨酰胺 + 0.1mg·L KT + 3%蔗糖 + 0.8%琼脂，pH 5.8。 A.3 根丛增殖培养基 -1 -1 -1 MS + 0.2g·L L-谷氨酰胺 + 0.1mg·L KT + 0.1mg·L 嘧啶醇 + 3%蔗糖 + 0.8%琼脂，pH 5.8。 A.4 生根预分化培养基 -1 -1 -1 -1 -1 MS + 0.2g·L L-谷氨酰胺 + 0.1mg·L NAA + 0.1mg·L 嘧啶醇 + 3%蔗糖 + 0.8%琼脂，pH 5.8。 A.5 生根培养基 -1 MS + 0.2g·L L-谷氨酰胺 + 0.1mg·L NAA + 0.1mg·L 嘧啶醇 + 6%蔗糖 + 0.8%琼脂，pH 5.8。 _________________________________ 4