ICS 67.080.10 B 31 DB51 四 川 省 地 方 标 准 DB51/T 1883—2014 柑橘中橘红 2 号染料的测定 高效液相色谱法 2014 - 11 - 11 发布 四川省质量技术监督局 2014 - 12 - 01 实施 发 布 DB51/T 1883—2014 目 次 前 言 ............................................................................... II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 原理 .............................................................................. 1 4 试剂与材料 ........................................................................ 1 5 仪器和设备 ........................................................................ 1 6 分析步骤 .......................................................................... 2 7 结果计算 .......................................................................... 2 8 精密度 ............................................................................ 3 附录 A（资料性附录） 参考色谱图 ...................................................... 4 I DB51/T 1883—2014 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则进行编写。 本标准附录A为资料性附录。 本标准由四川省农业厅提出并归口。 本标准由四川省质量技术监督局批准。 本标准起草单位：四川省农业科学院分析测试中心、四川省农业科学院质量标准与检测技术研究所 和四川省农产品质量安全中心。 本标准主要起草人：胡莉、雷绍荣、郭灵安、仲伶俐、李曦、毛建霏、杨晓凤、欧阳华学、黄建轶。 II DB51/T 1883—2014 柑橘中橘红 2 号染料的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了柑橘类水果中橘红2号染料的高效液相色谱测定法。 本标准适用于柑橘类水果中橘红2号染料的测定。 本标准橘红2号染料的检出限为0.03 mg/kg，定量限为0.1 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 柑橘类样品（带皮）匀浆后，橘红2号染料经有机试剂乙腈提取，盐析分层，通过氨基固相萃取小 柱净化后，由高效液相色谱C18色谱柱分离，紫外可见检测器在515 nm检测。保留时间定性、峰面积定量。 4 试剂与材料 4.1 4.2 4.3 4.4 4.5 4.6 4.7 以下所用试剂，除特别注明外均为分析纯试剂，水为符合 GB/T 6682 规定的一级水。 乙腈:色谱纯。 二氯甲烷：色谱纯 淋洗液：乙腈+二氯甲烷＝1+99（V+V） 氯化钠:分析纯。 氨基固相萃取小柱:6mL ,500 mg。 60%乙腈水:乙腈+水=60+40（V+V） 4.8 橘红 2 号标准储备液: 准确称取10 mg橘红2号标准品 (精确至0.1 mg)，用乙腈（4.2）溶解并定容至100 mL容量瓶中，配 制成100 µg/mL的标准储备液。保存于5℃冰箱中，有效期3个月。 4.9 橘红 2 号标准使用液： 吸取储备液用60%乙腈水（4.7）溶液经逐级稀释至浓度为 0.050、0.10、0.20 、0.50、1.0、2.0 和 5.0 µg/mL的标准使用液。现用现配。 5 仪器和设备 1 DB51/T 1883—2014 5.1 5.2 5.3 6 高效液相色谱仪，配紫外-可见检测器（或二极管阵列检测器）。 匀浆机。 天平：精度 0.1mg,0.01g。 分析步骤 6.1 试样预处理 6.1.1 6.1.2 6.2 柑橘类水果处理前除去泥、叶、梗等杂物，禁止清洗。 带皮切成大块后，进行粉碎匀浆，冷冻保存待测。 样品提取 准确称取25.0 g试样放入匀浆机中，加入50.0 mL乙腈(4.2)，在匀浆机中高速匀浆2 min（12000 转/min）后用滤纸过滤，滤液全部收集到装有5-7 g氯化钠的100 mL具塞量筒中，盖上塞子，剧烈震荡1 min，在室温下静置30 min，使乙腈和水相分层。 6.3 样品净化 从具塞量筒中吸取 10.00mL 乙腈溶液，放入 250 mL 磨口三角瓶中，在 40 ℃下旋转蒸发至干，加 入 3 mL 淋洗液（4.4）溶解，待净化。将氨基柱(4.6)用 6 mL 淋洗液（4.4）活化后，当溶剂液面到达 柱吸附层表面时，立即加入待净化溶液，使溶液自然下流，用 50 mL 梨形瓶收集洗脱液，用 3 mL 淋洗 液（4.4）润洗三角瓶后过柱，并重复一次。将梨形瓶中的洗脱液，在 40 ℃下旋转蒸发至干，用 5.0 mL 60 %的乙腈水（4.7）溶液充分溶解后，用 0.22 μm 滤膜过滤，待测。 6.4 测定 6.4.1 色谱条件 6.4.1.1 色谱柱：C18 柱，250 mm×4.6 mm，5.0 μm，或性能相当者； 6.4.1.2 流动相: A 为水；B 为乙腈； 6.4.1.3 检测波长：515 nm； 6.4.1.4 柱温：40℃； 6.4.1.5 进样量：20.0 μL； 6.4.1.6 梯度洗脱程序：起始状态为 60 % B，洗脱液为线性变化，至 10.0 min 时改变为 100 %B，保 持到 15.0 min，在 18.0 min 恢复到起始状态，并保持至 20.0 min。流速为 1.0 mL/min。 6.4.2 色谱分析 分别吸取20.0 μL标准溶液和样品溶液，注入液相色谱仪中，以保留时间定性，以样品溶液峰面积 与标准溶液峰面积比较定量。 7 结果计算 样品柑橘红2号染料含量以质量分数ω计，单位以毫克每千克(mg/kg)表示，按下列公式计算。 w= 式中： 2 ρ ×V ………………………………………………..（1） m DB51/T 1883—2014 ω⎯⎯柑橘红2号染料含量, mg/kg； ρ ⎯⎯待测液中柑橘红2号染料的质量浓度， mg/L； V ⎯⎯定容体积， mL； m ⎯⎯试样质量， g； 测定结果取两次测定的算术平均值，计算结果保留2位有效数字。 8 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15 %。 3 DB51/T 1883—2014 AA 附 录 A （资料性附录） 参考色谱图 图A.1 橘红 2 号染料标准溶液色谱图 2.0 µg/mL _________________________________ 4 DB51/T 1883—2014