ICS65.020.30 B43 团体标准 T/SDAA018－2021 鸡肉中37种兽药残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Determinationof37veterinarydrugresiduesinchickenby liquidchromatography-tandemmassspectrometry 2021－06－22发布 2021－07－23实施 山东省畜牧协会发布 全国团体标准信息平台 5T/SDAA018-2021 全国团体标准信息平台 6T/SDAA018-2021 前言 本标准按照GB/T1.1-2020给出的规则起草。 本标准由山东省畜牧协会提出并归口。 本文件起草单位：江苏省农业科学院、山东益生种畜禽股份有限公司、青岛农业大学。 本文件主要起草人：龚兰、赵航、王冉、魏瑞成、栾枫婷、陈明、邵雪梅、朱磊、张泽璟、 唐敏敏、何涛、郭龙宗、尹燕博。 本文件为首次发布。 全国团体标准信息平台 7T/SDAA018-2021 全国团体标准信息平台 8T/SDAA018-2021 鸡肉中37种兽药残留量的测定液相色谱-串联质谱法 1范围 本文件规定了鸡肉中磺胺类（甲氧苄啶、磺胺甲噁唑、磺胺间甲氧嘧啶，磺胺二甲基嘧 啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉），氟喹诺酮类（恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、诺 氟沙星、培氟沙星、洛美沙星、达氟沙星、沙拉沙星），四环素类（土霉素、四环素、金霉 素、强力霉素），硝基咪唑类（地美硝唑、甲硝哒唑、洛硝哒唑、异丙硝唑），大环内酯类（罗 红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、红霉素、阿奇霉素、克拉霉素），抗病毒类（金 刚烷胺、金刚乙胺），酰胺醇类（氯霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺、甲砜霉素），林可胺类（林 可霉素、克林霉素）残留量的液相色谱-串联质谱测定方法的前处理及检测步骤。 本文件适用于鸡肉中上述37种兽药残留量的测定。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期 的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括 所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 试样经甲酸乙腈水提取，固相萃取柱净化，用液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。 4试剂与配置 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水. 4.1乙腈：色谱级。 4.2甲醇：色谱级。 4.3甲酸：色谱级。 4.42%甲酸水：2mL甲酸加水稀释至100mL，混匀。 4.5甲醇-水溶液：10mL甲醇和90mL水，混合均匀。 4.6氢氧化钠溶液（c=0.03mol/L）：称取0.6g氢氧化钠，溶解于500mL水中，混匀。 4.70.1%甲酸水溶液：1mL甲酸（4.3）加水稀释至1L，混匀。 4.80.1%甲酸乙腈溶液：1mL甲酸（4.3）加乙腈稀释至1L，混匀。 全国团体标准信息平台 9T/SDAA018-2021 4.9标准储备液：磺胺类（甲氧苄啶、磺胺甲噁唑、磺胺间甲氧嘧啶，磺胺二甲基嘧啶、磺 胺间二甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉），氟喹诺酮类（恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、 培氟沙星、洛美沙星、达氟沙星、沙拉沙星），四环素类（土霉素、四环素、金霉素、强力 霉素），硝基咪唑类（地美硝唑、甲硝哒唑、洛硝哒唑、异丙硝唑），大环内酯类（罗红霉素、 替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、红霉素、阿奇霉素、克拉霉素），抗病毒类（金刚烷胺、 金刚乙胺），酰胺醇类（氯霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺、甲砜霉素），林可胺类（林可霉素、 克林霉素）（纯度均大于等于95%，具体见附录A）。（精确至0.01mg）于10mL容量瓶中，用 甲醇（4.2）溶解后定容至刻度；氟喹诺酮类用0.03mol/L的NaOH溶液（4.6）溶解，甲醇（4.2） 定容，分别配制成1000mg/L的标准储备液。于-18℃以下避光保存，有效期为3个月。 4.10混合标准中间液（1µg/mL）：分别准确移取标准储备液各0.1mL，用甲醇-水溶液（4.5） 稀释至刻度，混匀，4℃下避光保存。 4.11混合标准工作液：准确吸取混合标准中间液（4.11）适量，用甲醇-水溶液（4.5）稀释 成质量浓度分别为0.25、0.5、1、2、5、10、50和100μg/L的系列混合标准工作溶液。 5材料 5.1固相萃取小柱：氮乙烯吡咯烷酮与二乙烯基苯共聚物的混合型反相填料，200mg/6mL， 或者相当。 5.2微孔滤膜：0.22μm，有机相型。 6仪器设备 6.1液相色谱－串联质谱仪：配有电喷雾离子源。 6.2分析天平：感量0.01g、0.00001g。 6.3旋涡混合器。 6.4振荡器。 6.5超声波清洗器。 6.6离心机，最高转速为10000r/min。 6.7氮吹仪。 6.8固相萃取装置。 7样品 7.1试样的制备 将鸡肉样品用组织捣碎机绞碎，装入洁净容器，密封，标记。 全国团体标准信息平台 10T/SDAA018-2021 7.2试样的保存 将试样于-18℃以下保存。 8检测步骤 8.1提取 称取试样2g（精确至0.01g），置于50mL离心管中，准确加入3mL2%甲酸水（4.4）和 7mL乙腈（4.1），涡旋超声15min，振荡5min，4℃下10000r/min离心8min，取上清液于另 一个50mL离心管中，待净化。 8.2净化 用微量移液器准确吸取2mL上述上清样液通过固相萃取小柱（5.1）并弃去流出液，再 准确量取1.2mL样液通过小柱并收集样液，准确吸取1mL净化样液，于40℃氮吹至近干， 准确加入1mL甲醇-水溶液（4.5）复溶，过滤膜（5.2），待上机。 8.3基质匹配标准系列溶液的制8 取空白样品，按8.1和8.2处理制得空白样品提取液，精密量取混合标准工作液（4.11） 适量，用空白样品提取液稀释，配制得到37种兽药的基质匹配标准系列溶液。以色谱峰面积 为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线。37种兽药基质匹配标准溶液色谱图参见附录B中 的图B.1。 8.4测定 8.4.1液相色谱-质谱/质谱仪条件 色谱柱：HSST3色谱柱（100mm×2.1mm，1.7μm），或性能相当者。 柱温：40℃。 流速：0.3mL/min。 进样量：2L。 全国团体标准信息平台 11T/SDAA018-2021 流动相：A：0.1％甲酸水溶液（4.6），B：0.1%甲酸乙腈溶液（4.7），梯度洗脱程序见表1。 表1流动相梯度洗脱条件 8.4.2质谱参考条件 电离方式：电喷雾电离，正离子模式（ESI+）及负离子模式（ESI-）。 检测方式：多反应监测（MRM）。 离子源电压：±5.5kV。 离子源温度：500℃。 雾化气：50psi。 辅助气：55psi。 气帘气：45V。 碰撞气：8V。 多反应监测（MRM）离子对、去簇电压及碰撞电压见表2。时间（s） 0.1%甲酸水% 0.1%甲酸乙腈% 0.00 97 3 0.25 97 3 4.00 76 24 9.00 3 97 10.00 3 97 10.10 97 3 全国团体标准信息平台 12T/SDAA018-2021 表237种兽药的主要参考质谱参数 化合物 母离子 (m/z)子离子 (m/z)去簇电压 （V）碰撞电压 （V） 甲氧苄啶 291.1230*150 32 261.1 150 35 磺胺甲噁唑 254156*50 22 92 50 36 磺胺间甲氧嘧啶 281156.1*145 23 108.1 145 37 磺胺二甲基嘧啶 279186*35 25 156 35 26 磺胺间二甲氧嘧啶 311156*70 30 218 70 27 磺胺喹噁啉 300.9156*70 24 108 70 37 金刚烷胺 152.1135.1*80 25 93.1 80 40 金刚乙胺 180.1163.3*50 23 121.2 50 33 环丙沙星 322.1288.2*78 25 245.1 78 34 蒽诺沙星 360.2318.1*100 27 261.3 100 37 诺氟沙星 320.2302.1*70 30 276.2 70 23 培氟沙星 334.1290.2*80 26 233.1 80 36 氧氟沙星 362.3318.1*100 27 261.3 100 37 洛美沙星 352265.2*90 33 308.1 90 25 达氟沙星 358.2340.1*90 32 314.1 90 27 沙拉沙星 386.2342*80 26 299.2 80 39 土霉素 461.1426.4*70 28 443.3 70 19 四环素 445.2 410.3*70 29 全国团体标准信息平台 13426.9 70 21 金霉素 479.3444.2*70 32 462.1 70 24 强力霉素 445.1428.1*70 26 154.2 70 47 地美硝唑 14295.1*50 33 81.1 50 38 甲硝哒唑 17282*49 33 128.2 49 20 洛硝哒唑 201140*20 15 55.1 20 24 异丙硝唑 170.1124.2*48 25 109.2 48 36 氟苯尼考胺 248121.2*100 31 93.2 100 28 替米考星 869.869.3*38 59 174.3 38 58 罗红霉素 837.4158.2*74 43 679.4 74 30 螺旋霉素 843.6174.2*60 43 540.5 60 41 泰乐菌素 916.5174.1*87 49 772.3 87 40 红霉