ICS 13.060 CCS C 05 团体标准 T/CPMA 022—2020 生活饮用水中 13种四环素类药物残留测定 高效液相色谱- 串联质谱法 Determination of 13 tetracycline residues in drinking water by high performance liquid chromatagraphy -tandem mass spectrometry 2020-12-30发布 2021-05-01实施 中华预防医学会 发 布 全国团体标准信息平台 T/CPMA 022—2020 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1— 2009给出的规则起草。 本标准由江苏省疾病预防控制中心提出。 本标准由中华 预防医学会归口。 本标准起草单位：江苏省疾病预防控制中心、中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所、 无锡市疾病预防控制中心、 南京大学、 湖北省疾病预防控制中心、 宿迁市疾病预防控制中心、 江苏国创 环保科技有限公司。 本标准主要起草人：朱峰、吉文亮、 张岚、孟元华、 李爱民、周庆、 潘旸、李文涛、 张昊、刘德晔 、 刘华良、霍宗利、程士、李永刚、吕佳、刘小红、 雍宗锋、朱伟光、 刘文卫、 姚志建、吴宇伉、焦伟。 全国团体标准信息平台 T/CPMA 022—2020 1 生活饮用 水中13种四环素类药物残留测定 高效液相色谱 -串联质谱法 1 范围 本标准规定了生活饮用水中13种四环素类药物残留的高效液相色谱 -串联质谱测定方法。 本标准适用于生活饮用水中差向四环素、米诺环素、差向土霉素、四环素、土霉素、氯四环素、地 美环素、差向金霉素、金霉素、甲烯土霉素、强力霉素、 4-差向脱水四环素和脱水四环素的测定，进样 量为10.0 μL时，13种四环素类药物 的最低检测质量浓度 分别为差向四环素 1.95 ng/L、米诺环素 4.89 ng/L、差向土霉素 1.65 ng/L、四环素 1.61 ng/L、土霉素 1.77 ng/L、氯四环素 1.91 ng/L、地美环 素 4.88 ng/L、 差向金霉素 1.78 ng/L、金 霉 素 1.56 ng/L、 甲烯土霉素 4.91 ng/L、 强力霉素 4.98 ng/L、 4-差向脱水四环素 1.89 ng/L、脱水四环素 1.79 ng/L 。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 575 0 生活饮用水标准检验方法 3 原理 水样过滤后，用盐酸溶液调节 pH值至 3.0±0.2，用非极性固相萃取柱富集净化，甲醇洗脱待测物， 氮气吹干后用甲醇- 水溶液（2:8 ，v/v）重新溶解，高效液相色谱- 串联质谱法测定，内标法定量。 4 试剂与材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 4.1 试剂 4.1.1 甲酸（ HCOOH）：色谱纯。 4.1.2 甲醇（ CH 3OH）：色谱纯。 4.1.3 抗坏血酸（ C6H8O6）。 4.1.4 乙二胺四乙酸二钠（ C10H14N2Na2O8）。 4.1.5 浓盐酸（ HCl）：1.1 9 g/mL。 4.1.6 0.1%甲酸水溶液：取 1.0 mL甲酸，用水定容至 1000 mL，混匀。 4.1.7 甲醇-水溶液（2:8, v/v ）：取 200 mL甲醇加入 800 mL水中，混匀。 4.1.8 1 mol/L盐酸溶液：取 83 mL浓盐酸加适量水稀释并定容至 1000 mL，混匀。 全国团体标准信息平台 T/CPMA 022—2020 2 4.2 标准品 4.2.1 盐酸差向四环素(C 22H24N2O8·HCl, CAS: 23313- 80-6)。 4.2.2 盐酸米诺环素 (C23H27N3O7·HCl, CAS: 13614- 98-7)。 4.2.3 差向土霉素 (C22H24N2O9, CAS: 14206- 58-7)。 4.2.4 盐酸四环素 (C22H24N2O8·HCl, CAS: 64 -75-5)。 4.2.5 土霉素 (C22H24N2O9, CAS: 79- 57-2)。 4.2.6 盐酸氯四环素 (C22H23ClN 2O8·HCl, CAS: 514- 53-4)。 4.2.7 盐酸地美环素 (C21H21ClN 2O8·HCl, CAS: 64 -73-3)。 4.2.8 盐酸差向金霉素 (C22H23ClN 2O8·HCl, CAS: 101342- 45-4)。 4.2.9 盐酸金霉素 (C22H23ClN 2O8·HCl, CAS: 64 -72-2)。 4.2.10 盐酸甲烯土霉素 (C22H22N2O8·HCl, CAS: 3963- 95-9)。 4.2.11 强力霉素 (C22H26N2O9, CAS: 24390- 14-5)。 4.2.12 盐酸 4-差向脱水四环素 (C22H22N2O7·HCl, CAS: 4465- 65-0)。 4.2.13 盐酸脱水四环素(C 22H22N2O7·HCl, CAS: 13803- 65-1)。 4.2.14 米诺环素- D6 (C 23H21D6N3O7)。 4.2.15 四环素- D6(C22H18D6N2O8)。 4.2.16 强力霉素- D3(C22H23D3N2O9)。 4.3 标准溶液的配制 4.3.1 单一四环素类化合物标准储备液( ρ=100 μg/mL) ：分别准确称取差向四环素、米诺环素、差向 土 霉素、四环素、土霉素、氯四环素、地美环素、差向金霉素、金霉素、甲烯土霉素、强力霉素、 4-差向 脱水四环素、脱水四环素 10.0 mg，用甲醇溶解并定容 至100 mL，配成质量浓度为 100 μg/mL 的标准储 备液（盐酸盐以非盐酸盐计），在- 18 ˚C ~ - 16 ˚C冰箱中避光保存， 有效期为 1个月。 注1：各标准品纯度应大于 97%，或采用有证标准溶液 4.3.2 混合四环素类化合物标准使用液：分别准确移取差向四环素、差向土霉素、四环素、土霉素、 氯四环素、差向金霉素、金霉素、 4-差向脱水四环素、脱水四环素标准储备液 1.00 mL及米诺环素、地 美环素、甲烯土霉素、强力霉素标准储备液 2.50 mL于100 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配 成质 量浓度为 1.00 μg/mL（米诺环素、地美环素、甲烯土霉素、强力霉素为 2.50 μg/mL）的混合标准使用液。 临用现配。 4.3.3 单一四环素类内标化合物储备液( ρ=100 μg/mL) ：分别准确称取米诺环素- D6、四环素- D6、强力 霉素- D3 10.0 mg，用甲醇溶解并定容 至100 mL，配成质量浓度为 100 μg/mL 的内标储备液， 在-18 ˚C ~ -16 ˚C冰箱中避光保存。 注2：各标准品纯度应大于 97%，或采用有证标准溶液 4.3.4 混合四环素类内标化合物使用液( ρ= 1.00 μg/mL)：分别准确移取 1.00 mL米诺环素- D6、四环素 -D6、强力霉素- D3内标储备液于 100 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配成质量浓度为 1.00 μg/mL的 混合内标使用液 。临用现配。 4.4 材料 4.4.1 固相萃取柱：非极性二乙烯基苯基吸附剂填料 （6 mL，500 mg），或相当产品。 全国团体标准信息平台 T/CPMA 022—2020 3 4.4.2 微孔滤膜：尼龙材质，0.22 μm 。 4.4.3 玻璃纤维滤膜。 5 仪器与设备 5.1 高效液相色谱- 串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI ）。 5.2 分析天平：感量为 0.1 m g。 5.3 涡旋混合器。 5.4 超声波清洗器。 5.5 氮吹仪。 5.6 固相萃取仪。 5.7 pH计。 6 水样的采集及保存 6.1 采样瓶准备 采样前，先用纯水冲洗1 L 螺口棕色玻璃采样瓶 三次，再用甲醇冲洗两遍，最后用纯水冲洗三遍， 晾干备用。 6.2 水样的采集 采集水样前，先添加 30 mg抗坏血酸于采样瓶中，采集水样至满瓶，盖上瓶塞适当振摇，使抗坏血 酸溶解。采样时需佩戴一次性手套。采集末梢水时应先打开龙头放水数分钟后再采样。 6.3 水样的保存 采集到的水样应 标明标记，密封避光冷藏 （2 ˚C ~ 8 ˚C ）保存，在48 h内完成检测。 7 分析步骤 7.1 水样处理 7.1.1 水样经玻璃纤维滤膜过滤后，量取 500 mL水样，用盐酸溶液 调节水样 pH值至 3.0±0.2，依次 加入 0.25 g乙二胺四乙酸二钠和 10 μL混合四环素类内标化合物使用液( 1 .0 μg/mL) ，充分混匀后， 用非 极性固相萃取柱（上样前依次用 5.0 mL甲醇和 5.0 mL纯水活化平衡）进行富集净化，上样流量为 20 mL/min。上样结束后，先用 5.0 mL的纯水以 2 mL/min 的流量进行淋洗，再用真空泵抽干固相萃取柱， 最后用 6.0 mL甲醇