ICS 11.100.10 C 04 T/ CPMA 006 — 2019 空肠弯曲菌、结肠弯曲菌检验方法 Identification of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli 2019 年 8 月 16 日发布 2019 年 9 月 1 日实施 团体标准 中华预防医学会发布 全国团体标准信息平台 T/ CPMA 006 — 2019 II 目 次 前 言 ................................ ................................ ..... III 1 范围 ................................ ................................ ...... 1 2 设备和材料 ................................ ................................ 1 3 培养基和试剂 ................................ .............................. 1 4 检验程序 ................................ ................................ .. 2 5 检测步骤 ................................ ................................ .. 3 6 结果报告 ................................ ................................ .. 7 7 生物安全 ................................ ................................ .. 8 附录 A （规范性附录） 培养基和试剂的成分及制法 ................................ . 9 A.1 粪便标本采集液的成分及制法 ................................ .............. 9 A.2 食品样品漂洗液的成分及制法 ................................ .............. 9 A .3 增菌液的成分及制法 ................................ ...................... 9 A.4 哥伦比亚血琼脂平板成分及制法 ................................ ........... 10 A.5 Karmali 琼脂平板成分及制法 ................................ .............. 1 1 全国团体标准信息平台 T/ CPMA 006 — 2019 III 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 - 2009 给出的规则起草。 本标准由中华预防医学会归口。 本标准 起草单位：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所、 国家食品安全风险评估中 心、黑 龙江省疾病预防控制中心、北京市顺义区疾病预防控制中心、深圳市南山区疾病预防 控制中心。 本标准主要起草人：张茂俊、张建中、郭云昌、 遇晓杰、 段永翔、顾一心、李颖、 李薇 薇、闫军、 马红梅、鞠长燕 。 全国团体标准信息平台 T/ CPMA 006 — 2019 1 空肠弯曲菌、结肠弯曲菌检验方法 1 范围 本标准规定了空肠弯曲菌（ Campylobacter jejuni ）、结肠弯曲菌（ Campylobacter coli ） 的检验方法。 本标准适用于粪便标本、食品和水样品中空肠弯曲菌、结肠弯曲菌的检验。 2 设备和材料 2.1 冰箱 ： 4 ℃ ～ 8 ℃ ， - 20 ℃ ， - 80 ℃ ； 2.2 恒温培养箱 ： 42 ℃ ±1 ℃ ， 36 ℃ ±1 ℃ ； 2.3 微需氧培养装置：提供微需氧气体条件（ 5% 氧气、 10% 二氧化碳和 85% 氮气） ； 2.4 水浴装置 ： 36 ℃ ±1 ℃ 、 100 ℃ ； 2.5 离心机 ： 离心 力 ≥20000 g ； 2.6 天平：感量 0.1 g ； 2.7 显微镜： 10 倍～ 100 倍，有相差功能； 2.8 培养皿：直径为 90 mm 或 60 mm ； 2.9 pH 计或 pH 比色管或精密 pH 试纸； 2.10 振荡器； 2.11 过滤装置及滤膜 （ 0.22 μ m 、 0.45 μ m ）； 2.12 均质器与配套均质袋； 2.13 基因扩增仪； 2.14 DNA 电泳仪； 2.15 凝胶成像系统； 2.16 弯曲菌分离培养试剂盒。 3 培养基和试剂 3.1 粪便标本采集液： 见附录 A 中 A.1 。 3.2 食品样品漂洗液： 见附录 A 中 A.2 。 3.3 增菌液： 见附录 A 中 A.3 。 3.4 哥伦比亚血琼脂平板： 见附录 A 中 A.4 。 3.5 Karmali 琼脂平板： 见附录 A 中 A.5 。 全国团体标准信息平台 T/ CPMA 006 — 2019 2 3.6 空肠弯曲菌标准菌株 ATCC700819 。 3.7 结肠弯曲菌标准菌株 ATCC33559 。 4 检验程序 空肠弯曲菌、结肠弯曲菌检验程序见图 1 。 42 ℃ ±1 ℃ 24 h ～ 36 h 42 ℃ ±1 ℃ 24 h ～ 48 h 42 ℃ ±1 ℃ 24 h ～ 48 h 图 1 空肠弯曲菌、结肠弯曲菌检验 程序 粪便标本 过滤 接种 Karmali 或者哥伦比亚血琼脂平板， 微需氧培养 食品样品 水样品 充分漂洗食品样品后取 漂洗液增菌培养 富集水样品，取富集液增菌微需 氧 挑取形态疑似菌落接种 Karmali 或哥伦比亚血琼脂平板 PCR 核酸鉴定 生化鉴定 报告结果 氧化酶试 验 过氧化氢酶试验 马尿酸水解试验 吲哚乙酸酯水解试验 取粪便标本或肛拭子 增菌培养 革兰氏染色 全国团体标准信息平台 T/ CPMA 006 — 2019 3 5 检测步骤 5.1 标本及样品采集、运输及前期处理 5.1.1 腹泻患者或者健康人粪便标本 尽量在患者使用抗生素前 无菌 采集新鲜粪便标本 3 g ～ 5 g （或者黄豆至蚕豆大小） ， 将 标本直接置于便盒中， 冷藏保存 （不可冷冻）， 当天送 检 。粪便量小于 3 g （黄豆大小） 、 便拭子或者肛拭子，可 放入 Cary - B l air 运送培养基 中， 冷藏 运输，当天 送检 。便拭子或者肛 拭子也可直接 放入弯曲菌的 增菌液中， 冷藏运输， 当天运送实验室 或 24 h 内进行增菌培养。 注 ： 腹泻患者标本采集时，黏液便尽量 挑取有脓血 和 黏液部分 。使用便拭子采集时，尽量将 沾有 标品的棉签部分浸入在运输培养基或者保存液的液面以下，采集标本后应迅速拧紧管口或者盖口。 5.1.2 家禽、家畜及其泄殖腔中粪便标本 直接将标本置于便盒中运输，或者无菌挑取黄豆粒大小标本直接放入装有 1.5 mL 的 无 菌生理盐水或者 PBS 缓冲液中，冷藏保存及运输， 24 h 内进行检测。 5.1.3 整禽胴体及分割肉样品 使用无菌均质袋采集整只禽胴体，冷藏运输回实验室，加入适量的样品漂洗液淹没样品 （一般每 1 kg 样品加入 500 mL 样品漂洗液） ，置于振荡器上， 100 r/min 震荡 15 min ，反 复揉搓禽胴体 5 min （注意各个部位均要揉到） 。无菌操作取出禽胴体，取 2 mL 漂洗液进行 检测 。 如果当天不能检测可将禽肉样品浸润在漂洗液中 ， 放置