T/GZTPA 贵州省绿茶品牌发展促进会团体标准 T/GZTPA0009-2021 贵州茶叶中风味挥发性物质的测定 气相色谱质谱法 DeterminationofvolatileflavouredcompoundsinGuizhoutea Gaschromatographymassspectrometry 2021-11-25发布 2021-11-26实施 贵州省绿茶品牌发展促进会发布 全国团体标准信息平台 T/GZTPA0009-2021 I 前言 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由贵州省农产品质量安全监督检验测试中心提出。 本文件由贵州省绿茶品牌发展促进会提出并归口。 本文件起草单位：贵州省农产品质量安全监督检验测试中心、广东省科学院测试分析研究所（中国 广州分析测试中心）、贵州省绿茶品牌发展促进会。 本文件主要起草人：李俊、蔡滔、王震、向章敏、刘凯、熊胜利、赖飞、徐嘉民、方舒婷、丁静、 祝愿、王志、杜楠、张兴伦、周雪丽、王艺蓉、刘佳、王晓鹭、苏美丞。 全国团体标准信息平台 T/GZTPA0009-2021 1 贵州茶叶中风味挥发性物质的测定气相色谱质谱法 1范围 本文件规定了贵州茶叶中主要风味挥发物质组成及含量的方法。 本文件适用于贵州茶叶中主要风味挥发物质含量的测定。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用 文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单） 适用于本文件。 GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性 与再现性的基本方法 NY/T2102茶叶抽样技术规范 3术语与定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4原理 在一定温度条件下，顶空瓶内茶叶样品的挥发性组分向上空间挥发，产生蒸气压，在气-固二相达 到热力学动态平衡时，其物质组成和浓度在两相基本保持一致，再采用固相微萃取纤维头对气相部分 物质进行吸附萃取，通过进样口解析后进行色谱分离，然后再通过质谱仪进行物质定性分析，并采用 内标相对含量法对风味挥发物质进行相对含量测定。 5试剂或材料 除非另有规定,仅使用分析纯试剂。 5.1氯化钠（NaCl）； 5.2乙酸苯乙酯（C10H12O2）：色谱纯，； 5.3正己烷（C6H14）：色谱纯； 6仪器设备 6.1气相色谱-质谱联用仪：气相色谱-质谱，EI源。 6.2固相微萃取仪； 6.3萃取纤维头：50/30μm，PDMS/DVB/CAR； 6.4顶空瓶：20mL； 全国团体标准信息平台 T/GZTPA0009-2021 2 6.5分析天平：感量0.1mg。 7样品制备与保存 7.1制样 茶叶样品按照NY/T2102进行采样和分样后，取样品约200g，经粉碎机粉碎，过60目筛，制成 茶叶粉末，一式两份。 7.2保存 试样密封避光保存于4℃冰箱，待用。 8分析步骤 8.1样品制备处理 称取茶叶样品0.2g（精确至0.0001g）至20mL顶空样品瓶中，加入0.2g（精确至0.001g）氯 化钠，用玻璃棒混匀，同时加入50ng的内标物乙酸苯乙酯，用顶空瓶盖将其密封。然后将顶空瓶放入 到固相微萃取仪加热装置中，在60℃条件下平衡20min，利用固相微萃取纤维头吸附20min，在250℃ 进样口解析进行气相色谱质谱分析。 8.2分析条件 8.2.1固相微萃取条件 a)纤维头PDMS/DVB/CAR; b)样品孵化温度：60℃； c)样品孵化时间：20min； d)萃取吸附时间：20min； e)解析温度：250℃； f)解析时间：3min。 8.2.2色谱条件 a)色谱柱1：HP-FFAP(50m×200μm，0.3μm)或等效柱；色谱柱2：DB-WAX(30m×250μm，0.25μm) 毛细管气相色谱柱或等效柱； b)载气条件：流速1.0mL/min，不分流进样； c)进样口温度：250℃； d)色谱柱1柱温箱升温程序：炉温初始为40℃，保持2min，以2℃/min升温至220℃，保4min； 样品运行时间：92min），溶剂延迟时间：4min； e)色谱柱2柱温箱升温程序等同于色谱柱1柱温箱升温程序。 f)传输线温度：260℃。 8.2.3质谱条件 a）扫描方式：质量全扫描模式，扫描质量数范围：40m/z~450m/z; b）电离方式：电子轰击电离源(EI源，电子能量70eV); 全国团体标准信息平台 T/GZTPA0009-2021 3 c）离子源温度：230℃； d）四级杆温度：150℃； e）电离电压：70eV。 8.3定性与定量 8.3.1保留指数定性 在相同的条件下进行样品测定，被测试样中目标化合物色谱峰的保留指数与附录中提供化合物或查阅资 料的保留指数相比较，相对误差应在±2.0%之内。 8.3.2物质鉴定定性 实验质谱数据采用NIST标准谱库自动检索相识度匹配与人工解析相结合，查阅有关质谱资料，对质荷 比、相对峰度、分子离子峰等进行分析，质谱信息的正向和反向匹配相似度≥800的色谱峰可定性。 8.3.3定量分析 采用乙酸苯乙酯的内标相对含量法或面积归一法半定量。 8.4样品测定 将试样注入气相色谱-质谱联用仪，经色谱分离，质谱检测采集质谱数据，设定自动识别信噪比大于100 的色谱峰，使用NIST数据库进行相识度匹配；所检索的化合物的正向和反向匹配相似度均>800以上的色 谱峰，采用内标相对定量法（假定校正因F=1），得到各风味挥发物质的相对含量。3种典型茶叶中风味挥 发物质参见附录A。 8.5平行试验 按以上步骤对同一试样进行平行试验测定。 8.6空白试验 除不加试料外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。 9结果计算 9.1内标相对定量 以乙酸苯乙酯为内标，采用内标相对定量法（假定校正因F=1），按公式（1）计算： FAA isi is i  ┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈（1） 式中: ρi—试验中某种风味挥发物质的质量浓度(ng·kg-l)； ρis—试验中内标的质量浓度(ng·kg-l)； Ai—试验中某种风味挥发物质的色谱峰面积； Ais—试验中内标的色谱峰面积； F—校正因子。 计算结果应扣除空白值，计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示， 保留两位小数。 全国团体标准信息平台 T/GZTPA0009-2021 4 9.2面积归一法定量 试样中某种风味挥发物质的百分比Y按式(2)计算,通过测定相应峰面积对所有成分峰面积总和的 百分数来计算给定组分i的含量： %100 iss iAA Yi┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈┈（2） 式中: Yi—试样中某种风味挥发物质占总风味挥发物质的百分比,单位为百分率（%）； Asi—试样测定液中组分i的峰面积; ∑As—试样测定液中各风味挥发物质的峰面积之和。 如果符合（10.2），取两次测量的算数平均值作为结果，结果保留3位有效数字。 10实验要求 10.1空白及平行样实验要求 每次实验均要求带入样品空白和样品平行样实验，每个平行进样一次即可，取平均值作为实验结 果。 10.2重复性 在重复条件下同一样品获得的测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。 全国团体标准信息平台 T/GZTPA0009-2021 5 附录A （资料性） 贵州典型绿茶风味挥发物质信息 A.1贵州典型绿茶风味挥发物质总离子流(TIC)质谱色谱图见图A.1 RT:0.00 - 97.00 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 Time (min)0102030405060708090100Relative Abundance62.30 56.98 40.66 53.67 36.90 50.3830.11 33.70 88.65 74.76 47.2423.90 43.20 17.81 92.26 84.41 7.95 66.36 72.52 11.87 80.12NL: 2.99E7 TIC MS TEST0128- 005 a)安顺普定朵呗毛峰绿茶 RT:0.00 - 97.05 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 Time (min)0102030405060708090100Relative Abundance60.49 57.00 40.6730.65 50.4154.91 35.62 74.77 28.46 92.28 43.95 84.03 24.08 66.38 17.87 87.96 72.53 8.00 77.29 11.89NL: 4.50E7 TIC MS TEST0128- 006 b)石阡毛尖绿茶 RT:0.00 - 97.04 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 Time (min)0102030405060708090100Relative Abundance62.33 57.01 36.9340.67 53.69 50.42 74.78 30.63 84.4388.6647.26 17.84 92.27 43.23 23.91 7.88 68.6372.55 77.18 11.85NL: 2.59