ICS 65.020.20 B 05 团体标 准 T/FSSJ SYNY002—2020 代替T/FSSJ SYNY002 -2017 香菇栽培种工厂化生产技术规程 Production Technical Practice for Factory Cultivation of Letinous edodes Spawn 2020 - 01 - 20发布 2020 - 01 - 20实施 辽宁省食用菌协会 发布 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/FSSJ SYNY002—2020 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 －2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。 本标准由辽宁省食用菌协会提出。 本标准由辽宁省食用菌协会归口。 本标准起草单位： 辽宁三友农业生物科技有限公司、 辽宁省微生物科学研究院、 辽宁省食用菌协会。 本标准主要起草人：邹存兵、赵铠、朱巍巍、张忠伟、陈飞、黄云松、李莹莹、孙凯、 刘东旭、刘 芳岑、盛金、王俊超。 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/FSSJ SYNY002—2020 1 香菇栽培种工厂化生产技术规程 1 范围 本标准规定了 液体菌种生产香菇栽培种的术语和定义、液体菌种制备与相关技术要求、栽培种制作 工艺、栽培种质量检查、生产记录与存档、留样、标签标志包装运输。 。 本标准适用于 本标准适用于香菇栽培种的工厂化生产 。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用 是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 19170 香菇菌种 GB/T 12728 食用菌术语 GB/T 150.4 压力容器 第4部分：制造、检验和验收 NY/T 1742 食用菌菌种通用技术要求 NY/T 1731 食用菌菌种良好作业规范 NY/T 528 食用菌菌种生产技术规程 NY/T 1846 食用菌菌种检验规程 3 术语和定义 GB/T 12728 界定的以及下列术语和定义适用于本文件 。 3.1 发酵罐 fermentation bioreactor 进行发酵培养的专用设备，也称发酵反应器。 3.2 罐压 pressure of fermentation bioreactor 指液体菌种培养过程中培养器内保持的空气压力，单位： Mpa。 3.3 通风量 ventilation volume 液体菌种培养时每分钟通入培养基中的无菌空气的量。用 V/V（培养基体积 /通入空气体积）标示。 3.4 接种量 inoculation quantity 接入培养器中的菌种的数量，以菌种体积与培养基体积的百分比标示。 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/FSSJ SYNY002—2020 2 3.5 摇瓶液体种 flask culture 装在玻璃三角瓶内于摇床上恒温振荡培养的液体菌种。 3.6 初始pH值 initial pH 液体培养基配制灭菌后未接种时的 pH值。 4 人员 应有与液体菌种生产所需的专业技术人员，包括检验人员 。 5 场地和设施 5.1 生产场地、厂房和 布局 通风良好，交通便利。周围无工矿企业污染源、生活垃圾堆放和填埋场、工业固体废弃物和危险废 弃物堆放和填埋场等。 有堆料场、原 料库、拌料室、分装室、灭菌室、冷却室、接种室、培养室、贮存室等，满足生产需 求。布局符合 符合NY/T 528 规定。 5.2 生产设施与设备 根据生产需 求进行配备，基本设备应具有磅秤、拌料机、全 /半自动装袋窝口机、高压蒸汽锅炉等 。 使用符合NY/T 1731设备管理 规定。压力容器应符合 GB/T 150.4 规定并经政府有关部门检验合格。 6 生产工艺流程 母种→摇瓶液体种→发酵罐液体种 ↓ 培养料配制→装袋→灭菌→冷却→接种→培养→ 栽培种 7 培养基 母种培养基使用附录 A中A.1规定的马铃薯葡萄糖琼脂培养基（ PDA）或A.2规定的综合马铃薯葡萄糖 琼脂培养基（ CPDA）。液体种培养基根据香菇品种及当地原料的要求使用适宜配方（见附录 B），严格 掌握初始 pH。 栽培种培养基配方参照 NY/T 528 标准附录 B 原种和栽培种常用培养基配方及其适用种类，根据香 菇品种及当地原料的要求选择使用。 8 母种 母种继代培养后须按 NY/T 1846 规定抽样，并进行感官检验和菌丝微观特征检验，合格菌种进入生 产流程。母种质量要求符合 NY/T 1742 关于母种生产的规定。 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/FSSJ SYNY002—2020 3 9 摇瓶液体菌种生产 9.1 培养基分装及灭菌 摇瓶液体种培养基装量 为容器体积的 1/4至1/3， 分装后立即灭菌。 按常规高压蒸汽灭菌锅操作规程， 0.1Mpa～0.12Mpa（121℃～126℃），维持 25min。 灭菌后的摇瓶液体种培养基于 30℃±1℃ 培养箱恒温培养 48小时后，观察确认无混浊、无异味，可 用于接种 培养。 9.2 接种 按无菌操作 规程，将母种斜面菌丝体切割成 2mm～4mm颗粒，移入摇瓶培养基中，每 100 mL液体培养 基接种菌丝体颗粒 1颗～3颗。 9.3 培养 菌种培养温度 26℃±1℃，空气相对湿度 55%～65%，避光振荡培养。往复式摇床振荡频率 60次～120 次/分， 旋转式摇床振荡频率 150转～180转/分。每日检查生长状态，及时检出浑浊、异味、泡沫异常 的不合格菌种。 摇瓶静置 1分钟后，菌丝球体积占比液体培养基体积的 4/5以上，可结束培养。 10 发酵罐液体菌种生产 10.1 空气过滤系统检查 使用前要拆分检查滤芯，要求无油污、料污、无破损，外壳内外壁要求无污物、光亮洁净。 滤芯在额定风量下，对粒径 0.1～0.2μm粒子的过滤效率大于 99.99%，空气阻力低于 280pa。 10.2 发酵罐检查与清洗 检查罐上全部阀门、安全阀、压力表、要求完好，工作正常。对罐体内、外和全部阀门用流水进行 冲洗，达到无死角、内壁无任何培养料残余物的洁净程度。 10.3 空消灭菌 发酵罐初次使用、出现染菌、长期放置 及更换品种时， 应进行空消灭菌。有内置电加热棒的培养器 加水至容积的 80%加热至121℃，维持 40min。用外源蒸汽灭菌的培养器，蒸汽压力达到 0.1Mpa～0.12Mpa （121℃～124℃），维持 40min。 10.4 投料定容 将配制好的培养基材料搅拌均匀，倒入或用泵抽入发酵罐中，加水定容至所需体积。培养基投料总 量为罐体总容积的 70%～80%。 10.5 灭菌和冷却 按高压蒸汽灭菌方法操作，培养器内压力达到 0.1Mpa～0.12Mpa，培养基温度达到 121℃～124℃、 保持时间 60 min～90 min。 灭菌结束将培养基降温至 24℃～28℃。 降温过程中要及时向培养器内补充过滤空气， 防止罐压回零。 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/FSSJ SYNY002—2020 4 10.6 接种 利用火焰保护接种，接种量为罐内培养基总量的 0.1%～0.5%。 10.7 培养 发酵罐通风量每分钟 1：0.5～1.2 V／V(料液体积／空气体积 )，调节罐压保持在 0.02 Mpa ～0.04 Mpa，培养温度调节在 24℃～26℃，培养7d～10d可达到香菇液体菌种成品标准。特殊品种根据特殊需求 具体设定。 10.8 检测和判定 培养开始3d后每日从发酵罐中取出样品进行检测。 按照NY/T 1846 中菌丝微观特征、细菌霉菌检验 方法检验，如异常则排空罐内培养物，空消，重新 生产。 发酵终 pH 3.5-4.0，每100ml液体菌种菌丝干离心后重量 1.4～2.0g/100ml 。合格香菇液体菌种球 状菌丝体呈白色，滤液呈淡黄色。菌球分布均匀、浓白清晰，有香菇液体菌种培养时特有的香气，无异 味。 11 栽培种生产 11.1 配料装袋 采用配套机械二级拌料法。按配方比例将木屑粗料先预湿后再同其他主料混合进行一级拌料，然后 再加入辅料进行二次拌料，要求拌料均匀、含水量达标。机械窝口，插入专用塑料芯塞。 11.2 灭菌和冷却 按高压蒸汽灭菌规程操作，排除冷空气后，升温至 121℃、压力 0.15MPa持续2.5h。灭菌后采 用阶梯 渐进式排气降压处理。 降压结束迅速进入冷却室，开启降温处理。当袋内温度降至 25℃下可以接种。 11.3 接种 液体菌种接种量为 20ml～30ml/袋，接种后 及时用无菌海绵塞封口 。 11.4 培养 培养温度以袋内中心温度为标准，保持袋内温度 22℃～23℃。培养室内空间相对湿度控制在 55%以 下，避光培养。接种 5d后启动内循环通风， 12d～15d加强通风保持温度低于 25℃。当菌丝长满菌袋后， 降低培养室温度至 10℃～15℃，持续内循环通风 3-5d。 11.5 抽样和检测 按GB 19170 规定进行 抽样和检测。 11.6 入库