T 江苏省食用菌协会团体标准 T/JSEFA 001—2018 草菇菌种制作技术规程 Technical specification for volvariella volvacea strains produced 江苏省食用菌协会 发布 2018- 2 - 28发布 2018- 2 - 28实施 T/JSEFA 001—2018 I 目 次 目 次 ............................................................................... I 前 言................................................................................ II 1 范围................................................................................. 1 2 规范性引用文件 ....................................................................... 1 3 场地环境 ............................................................................. 1 3.1 场地要求 ....................................................................... 1 3.2 环境要求 ....................................................................... 1 4 设备设施 ............................................................................. 1 4.1 基本设备 ....................................................................... 1 4.1 基本设施 ....................................................................... 1 5 制作技术 ............................................................................. 1 5.1 母种制作 ....................................................................... 1 5.2 原种制作 ....................................................................... 2 5.3 栽培种制作 ..................................................................... 3 6 贮存、运输与记录 .................................................................... 4 6.1 菌种贮存 ....................................................................... 4 6.2 运输 ........................................................................... 4 6.3 记录 ........................................................................... 4 T/JSEFA 001—2018 II 前 言 本标准的编写按照 GB/T 1.1—2009《标准化工作导则第 1部分：标准的结构和编写规则》的规定编 写。 本标准由江苏江南生物科技有限公司提出。 本标准由江苏江南生物科技有限公司、江苏省农业技术推广总站起草。 本标准主要起草人：姜建新、顾鲁同、 马金骏、李长田、张金霞、陈明杰、谢宝贵、张艳荣、杨华 平。T/JSEFA 001—2018 1 草菇菌种制作技术规程 1 范围 本标准规定了草菇菌种生产的场地环境、设施设备、制作技术、标 识、包装运输及贮存。 本标准适用于草菇母钟、原种、栽培种的 固体菌种生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 3095 环境空气质量标准 GB 5749 生活饮用水卫生标准 GB/T 23599 草菇菌种 NY/T 528 食用菌菌种生产技术规程 NY/T 1846 食用菌菌种检验规程 NY 5099 食用菌栽培基质安全技术要求 3 场地环境 3.1 场地要求 生产场地应地势高燥、通风良好、排水畅通、交通便利。 3.2 环境要求 应远离“三废”污染 的工厂、生活区、禽畜养殖场等；空气质量应符合GB 3095规定；水质应 符合GB 5749规定；其他条件应符合NY/T 528的有关规定。 4 设备设施 4.1 基本设备 按NY/T 528中4.4.1规定执行。 4.2 基本设施 : 按NY/T 528中4.4.2规定执行。 5 制作技术 5.1 母种制作 5.1.1 母种来源 T/JSEFA 001—2018 2 按NY/T 528中4.5.1规定执行。 5.1.2 培养基配方 PDA培养基或PSA培养基。 5.1.3 培养基制作 5.1.3.1 分装 将配制好的PDA培养基或PSA培养基分装至符合NY/T 528规定的Φ18mm×180mm或Φ20mm×200mm 的玻璃试管中，装量为每管10ml～15ml，长度为试管 1/5左右。试管口应保持干净，随后塞入棉花塞 或硅胶塞，并用防水纸包扎。 5.1.3.2 灭菌 将分装和包扎好的试管直立放在高压灭菌锅内加热灭菌。加热到0.05MPa时，打开排气阀，排尽 高压灭菌锅内的空气，待压力指针回到零点后 ，关闭排气阀，重复操作两次。当压力升到 0.1MPa（温 度为121℃）时，保持30min后停止加热，待指针回到零点，打开锅盖。用自动灭菌器的按照说明书 操作。 5.1.3.3 斜面培养基制作 从灭菌锅中取出试管，当试管冷却到 60℃左右时，趁热将试管倾斜摆放在桌面上 ，试管口比试 管底部高1cm～1.5cm，做成培养基斜面，斜面长度为试管长度的2/3左右。 5.1.3.4灭菌效果检查 将灭菌后的培养基置于28℃±2℃条件下，培养2d～3d后检查有无细菌或霉菌的菌斑。 5.1.4消毒与接种 5.1.4.1 消毒 将接种用具、培养基放到接种箱或超净工作台内。接种箱应用气雾消毒剂消毒，用量 5g/m3 ； 有紫外线灭菌灯的，同时开启照射30min。超净工作台使用前应开机 30min 净化。接种人员应注意 清洁卫生，穿戴上经消毒过的工作服、工作帽、口罩，按无菌操作要求，手部和试管菌种表面应用 酒精消毒。 5.1.4.2 接种 严格按照无菌操作有关要求进行操作。每批接种完后应及时贴上标有菌号和接种日期的标签。 5.1.5 培养 将接种后的试管置于30℃～ 32℃培养箱或培养室恒温培养5d～7d，当菌丝长满试管，并产生少 量红褐色厚垣孢子时结束培养。培养期间定期检查，及时拣出不合格菌种。 5.1.6 质量检验 母种质量应符合GB/T 23599标准中第4章4.1有关要求。按照 NY/T 1846规程进行检验。 合格母种的感官判断指标为菌丝呈灰白至黄白色，菌丝粗壮，萌发生长快，分布均匀，气生菌 丝旺盛，爬壁力强，菌丝分枝角度大，能产生大量红褐色的厚垣孢子。 T/JSEFA 001—2018 3 5.2 原种制作 5.2.1 培养料配方 棉籽壳 90%、麸皮 6%～7%、生石灰 3%～4%、料水比1：（1.4～1.5）、pH值为8.0～9.0。 5.2.2 培养料堆制 按5.2.1配方比例混合，预湿后建堆，堆沤发酵4d～5d，2d左右翻料一次。堆料时须检查，pH 值不低于8.0～9.0，含水量60%～65%。 5.2.3 装瓶 采用650ml～750ml 玻璃菌种瓶装料，装料稍压实，装料量至瓶肩为度，封好瓶口，包扎防水纸。 5.2.4 灭菌 5.2.4.1操作方法 将分装好的原种培养料移入高压蒸汽灭菌锅密闭加热灭菌。当压力表指针升至 0.05 MPa时，打 开排气阀，排放高压灭菌锅内的空气，等压力指针降到零点时，关闭排气阀。继续加热升温，当压 力升到0.1 MPa时，打开排气阀，排放锅内空气，待压力表指针降至零时，关闭排气阀，继续加热升 温。保持压力 0.14 MPa～0.15 MPa（温度126℃）时，保持2h。2h后停止加热，当灭菌锅指针回到