ICS 07.100.01 CCS B 04 团体 标准 T/CI 160—2022 极端环境真菌的分离、培养、保藏和应用技 术指南 Technical guidelines for isolation, culture, preservation and application of extreme environmental fungi 2022 - 12 - 15发布 2022 - 12 - 15实施 中国国际科技促进会 发布 全国团体标准信息平台 T/CI 160 —2022 I 目次 前言 ................................ ................................ ................. II 引言 ................................ ................................ ................ III 1 范围 ................................ ................................ ............... 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ..... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ......... 1 4 缩略语 ................................ ................................ ............. 2 5 试剂和材料 ................................ ................................ ......... 2 6 耗材与仪器 ................................ ................................ ......... 3 7 样品采集、现场处理及资料整理 ................................ ....................... 3 8 极端真菌的分离、培养、纯化 ................................ ......................... 4 9 极端真菌生长温度的确定（无菌操作） ................................ ................. 6 10 嗜盐真菌抗盐性的确定（无菌操作） ................................ .................. 6 11 极端真菌降解毒素、钝化重金 属的指标及检测方法 ................................ ...... 6 12 极端真菌全基因组 DNA的提取 ................................ ........................ 7 13 极端真菌 18s rDNA 基因片段的扩增 ................................ ................... 7 14 极端真菌的分子鉴定 ................................ ................................ 7 15 极端真菌样品及种质资源保藏 ................................ ........................ 8 附录A（资料性） 极端环境真菌样品采集、鉴定、保藏记录表格式 .......................... 10 附录B（资料性） 极端环境真菌的分子鉴定 ................................ .............. 12 参考文献 ................................ ................................ ............. 13 全国团体标准信息平台 T/CI 160 —2022 II 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由中国国际科技促进会提出并归口。 本文件起草单位：沈阳农业大学、辽宁伊品九利农业科技发展有限公司、沈阳汉明种业有限公司、 东北农业大学、吉林大学、沈阳市食品药品检验所、沈阳九利肥业股份有限公司、黑龙江省农业科学院 耕作栽培研究所、香港中文大学。 本文件主要起草人：张世宏、魏 毅、于术军、刘庆玉、李凤兰、李桂华、耿丽娟、李柱刚、林汉 明。 全国团体标准信息平台 T/CI 160 —2022 III 引言 本文件的发布机构提请注意，声明符合本文件时 ，可能涉及 3.1、3.4、5.4、5.12、5.17、5.18、 7.1、7.2.1、7.2.2a）、7.3、7.4、8.1、8.2.1、8.3、9.3、10、12、13、14、15中相应内容的专利《一 种抗盐耐碱的曲霉菌株、其 ITS序列及应用 ZL 2018 1 0855005.0 》、《一种源于极端抗盐碱曲霉的纤维 素酶基因及应用 ZL 2016 1 0005024.5 》 、 《一株抗盐碱赭曲霉菌株 W1及其菌剂和应用 ZL 2019 1 0659129.6 》、 《耐碱嗜盐类型的灰绿曲霉菌株及其在环境治理中的应用 ZL 2013 1 0162347.1 》的使用。 本文件的发布机构对于该专利的真实性、有效性和范 围无任何立场。 该专利持有人已向本文件的发布机构承诺，他愿意同任何申请人在公平、合理且无歧视的条款和条 件下，就专利授权许可进行谈判。该专利持有人的声明已在本文件的发布机构备案 。 表1中列出的专利权人持有本文件涉及的专利。 表1 持有本文件涉及的专利的专利权人相关信息 专利持有人 地址 史洋 北京市朝阳区广渠路 36号首城国际 B区11号楼1单元2202 吉林大学 吉林省长春市前进大街 2699号 请注意除上述专利外，本文件的某些内容仍可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责 任。 全国团体标准信息平台 T/CI 160 —2022 1 极端环境真菌的分离、培养、保藏和应用技术指南 1 范围 本文件提供了极端环境真菌（以下简称“极端真菌”）的来源，分离、培养、鉴定、保藏方法和生 物技术应用指南。 本文件适用于极端真菌的分离、培养、鉴定、保藏与应用 。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件 ；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 2761-2017 食品安全国家标准 食品中真菌毒素限量 GB 13078 -2017 饲料卫生标准 GB 15618 -2018 土壤环境质量 农用地土壤污染风险管控标准（试行） GB 36600-2018 土壤环境质量 建设用地土壤污染风险管控标准（试行） 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 极端环境真菌 extreme environmental fungi 在常见普通真菌无法生存的极端环境条件下 （如高温低温、 高盐、高毒素、 缺水、 脱水、低氧厌氧、 高低压强等）能够正常生长、发育、繁殖的真菌。 注： 常见的普通真菌一般生长在温度 22℃～36℃， 湿度95％～100％，pH5～6.5的有氧环境。 普通真菌对高 /低温度、 高渗透（高盐与脱水）、高毒素、低氧或厌氧、高低压强等敏感、适应性差。 嗜冷真菌 psychrophilic fungi 最适生长温度小于等于 15℃、最高生长温度小于等于 25℃的真菌。 嗜热真菌 thermophilic fungi 最适生长温度大于等于 40℃、最低生长温度大于等于 20℃的真菌。 嗜盐真菌 halophilic fungi 在大于等于 5%钠、钾等常规盐离子浓度环境 生长最快的真菌。 毒素降解真菌 toxin-degrading fungi 适宜于在毒素环境生存，具有将呕吐毒素（ DON）、黄曲霉毒素（ AFT）、玉米赤霉烯酮（ ZEN）等 毒素降解为低毒或者无毒物质的真菌。 钝化重金属真菌 passivate heavy metal fungi 适宜于在重金属污染环境生存，具有钝化重金属，使其缓慢氧化或化合，减少离子状态，从而缓解 作物吸收的真菌。 重金属 heave metal 密度大于 4.5g/cm3 的金属。 注： 在环境污染方面